ICS71.100.70 CCSY42 GDCA 广东省化妆品学会团体标准 T/GDCA006—2021 化妆品原料对酪氨酸酶活性抑制试验方法 （体外法） Cosmeticingredients-Tyrosinaseactivityinhibitiontestmethod (invitro) 2021-10-29发布 2021-11-30实施 广东省化妆品学会  发布 全国团体标准信息平台 T/GDCA006—2021 I目次 前 言...........................................................................................................................................................II 1.范围.............................................................................................................................................................1 2.规范性引用文件.........................................................................................................................................1 3.术语和定义.................................................................................................................................................1 4.原理.............................................................................................................................................................1 5.仪器.............................................................................................................................................................1 6.试剂与材料.................................................................................................................................................2 7.实验方法.....................................................................................................................................................2 8.结果计算.....................................................................................................................................................2 9.试验有效性验证.........................................................................................................................................3 10.结果判定.....................................................................................................................................................3 全国团体标准信息平台 T/GDCA 006 — 2021 II 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东省化妆品学会提出并归口。 本文件起草单位：广州环亚化妆品科技有限公司、广东轻工职业技术学院、广东丸美生物技术股份 有限公司、广东工业大学、上海珈凯生物科技有限公司、佛山市银美联合科技有限公司、广东科玮生物 技术股份有限公司、广东药科大学、广州艾卓生物科技股份有限公司、广州华淼生物科技研究院有限公 司、广州市奥雪化工有限公司、完美（中国）日用品有限公司、珠海市大美湾化妆品创新研究院、珠海 市大美湾科技有限公司。 本文件主要起草人：刘芳、龚盛昭、孙云起、郭清泉、陈其龙、龙洁芳、倪 _f‚s 、刘环宇、冼宝 仪、 蔡义文、张逢春、贺晓静、杜志云、杨露。 本标准于2021年10月29日发布。 全国团体标准信息平台 T/GDCA006—2021 1化妆品原料对酪氨酸酶活性抑制试验方法 （体外法） 1.范围 本文件规定了一种体外酪氨酸酶活性抑制试验方法。 本文件适用于通过抑制酪氨酸酶活性而达到美白效果的化妆品水溶性原料的功效测试。 2.规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T9724化学试剂pH值测定通则 3.术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1体外法invitromethod 在活体生物之外的环境中进行的试验。 3.2半数抑制浓度medianinhibitionconcentration 引起酪氨酸酶活性50%抑制时对应的样品受试浓度。 3.3曲酸当量值kojicacidequivalentvalue 受试样品的半数抑制浓度与阳性对照曲酸的半数抑制浓度的比值。 4.原理 黑色素的合成受酪氨酸酶影响，酪氨酸酶能够催化L-酪氨酸羟化成多巴，并把多巴氧化成多巴醌， 多巴醌形成最终的反应产物黑色素。具有酪氨酸酶活性抑制作用的受试物可以减慢酪氨酸酶催化L-酪氨 酸转化成多巴醌，通过测定475nm处多巴醌的吸光度，根据吸光度的变化来评估受试物对酪氨酸酶活性 的抑制效果。 5.仪器 5.1单道可调移液器：量程10μL～100μL，100μL～1000μL，0.5mL～5mL。 5.28道可调移液器：量程5μL～50μL。 5.3分析天平：最小分度值0.0001g。 5.4酶标仪：涵盖475nm波长的范围。 5.5冰箱。 全国团体标准信息平台 T/GDCA 006 — 2021 2 6 . 试 剂 与 材 料 6 . 1 实 验 用 水 ： 采 用 符 合 G B / T 6 6 8 2 规 定 的 一 级 水 。 6 . 2 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液 （ P B S ） ： p H = 6 . 8 ， 0 . 1 m o l / L 。 6 . 3 L - 酪 氨 酸 ： 纯 度 ≥ 9 9 . 0 % ， 生 化 试 剂 B R 。 6 . 4 L - 酪 氨 酸 溶 液 ： 称 取 0 . 0 2 5 g L - 酪 氨 酸 ， 用 P B S 缓 冲 液 溶 解 ， 超 声 助 溶 ， 定 容 至 5 0 m L ， 现 配 现 用 。 6 . 5 蘑 菇 酪 氨 酸 酶 。 6 . 6 酪 氨 酸 酶 溶 液 ： 用 P B S 缓 冲 液 将 蘑 菇 酪 氨 酸 酶 配 制 成 5 0 0 U / m L ， 分 装 ， - 2 0 ℃ 保 存 ， 避 免 二 次 冻 融 。 6 . 7 曲 酸 ： 纯 度 ≥ 9 8 . 5 % ， 生 化 试 剂 B R 。 6 . 8 9 6 孔 酶 标 板 。 7 . 实 验 方 法 除 非 另 有 说 明 ， 本 文 件 所 提 到 的 受 试 样 品 的 浓 度 均 指 其 配 制 时 的 浓 度 。 7 . 1 受 试 物 处 理 阳 性 对 照 曲 酸 用 P B S 缓 冲 液 稀 释 成 ： 0 . 0 8 0 g / L 、 0 . 0 4 0 g / L 、 0 . 0 2 0 g / L 、 0 . 0 1 0 g / L 、 0 . 0 0 8 g / L 、 0 . 0 0 5 g / L 、 0 . 0 0 2 g / L 、 0 . 0 0 1 g / L 系 列 质 量 浓 度 梯 度 溶 液 。 受 试 物 处 理 ： 受 试 物 用 P B S 缓 冲 液 梯 度 稀 释 成 5 个 以 上 合 适