(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210850304.1 (22)申请日 2022.07.20 (71)申请人 中国医学 科学院病原生物学研究所 地址 100730 北京市东城区东单三条9号 (72)发明人 胡永峰　马凌燕　程敏　杨帆　 金奇　 (74)专利代理 机构 北京华科联合专利事务所 (普通合伙) 11130 专利代理师 王为 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 血清代谢物组合筛查在诊断肌张力障碍症 中的应用 (57)摘要 本发明的目的在于提供检测血清代谢物水 平的试剂在制备诊断肌张力障碍的试剂盒中的 应用， 其中所述血清代谢物包括： 2,3 ‑二氨基丙 酸， 苯丙氨酰苯丙氨酸， 花生四烯酸， L ‑焦谷氨 酸， L‑天门冬氨酸， L ‑谷氨酸， 油酸甘油酯， 次黄 嘌呤， D‑天门冬氨酸， 丙酮酸， 牛磺酸， 1 ‑油烯基 甘油， L‑苏糖酸， 马来酰胺酸， DL ‑苹果酸， 维生素 C和柠檬酸 等(表1.)。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 115184501 A 2022.10.14 CN 115184501 A 1.检测血清代谢物水平的试剂在制备诊断肌张力障碍的试剂盒中的应用， 其中所述血 清代谢物包括： 2,3 ‑二氨基丙酸， 苯丙氨 酰苯丙氨 酸， 花生四烯 酸， L‑焦谷氨酸， L‑天门冬氨 酸， L‑谷氨酸， 油酸甘油酯， 次黄嘌呤， D ‑天门冬氨酸， 丙酮酸， 牛磺酸， 1 ‑油烯基甘油， L ‑苏 糖酸， 马来 酰胺酸， DL ‑苹果酸， 维生素C， 柠檬酸， 副黄嘌呤， 14(S) ‑HDHA和L‑丝氨酸。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 检测血清代谢物水平的方法为GC ‑MS的非 靶向代谢组学的方法。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 试剂盒的检测方法， 包括以下步骤： (1)血清样本都在冰上解冻， 质量控制样本用于估计代表分析过程中遇到的所有分析 物的平均轮廓， (2)用2倍体积甲醇对血清样本进行处 理， 然后， 4℃， 140 00g离心10分钟， (3)用高效液相色谱 ‑质谱对上清液进行代谢组学分析， 样品分析采用W aters ACQUITY 超高性能液相色谱系统和Waters  Q‑TOF微质量系统进行在正负电离 两种模式下进行分析， (4)原始GC ‑MS数据的提取、 对齐、 反冗余后导出为包括变量(rt_mz)、 观测值和峰值强 度等的一个峰值数据集文件， 并进行进一 步的标准 化处理， (5)文件导入到生物统计学软件中， 执行偏最小二乘回归分析， R2X(PCA)或R2Y(PLS ‑ DA)定义为模 型所解释数据的方差占比， 表示拟合优度， Q2定义为模型可预测数据中的方差 占比， 表示当前模 型的可预测性， R2X、 R2Y和Q2的值被用作指标来评估模式识别模 型的稳健 性， 差异显著的代谢物由PLS ‑DA模型的VIP值>1和双尾t检验对标准化峰值强度的P值(< 0.05)组合确定， 折叠变化(FC)以两组间平均峰值强度比的二值对数计算， VIP估计PLS ‑DA 模型中各变量的重要性； VIP评分>1的变量在模型中有很 重要作用， (6)利用受试者工作特征曲线诊断各种代谢物在评估疾病中的重要性， 并建立模型， 发 现重要的疾病生物分子标识及组合。 4.一种诊断肌张力障碍的产品， 其特征在于， 该产品包括检测血清代谢物水平的试剂， 其中所述血清代谢物包括： 2,3 ‑二氨基丙酸， 苯丙氨 酰苯丙氨酸， 花生四烯 酸， L‑焦谷氨酸， L‑天门冬氨 酸， L‑谷氨酸， 油酸甘油酯， 次黄嘌 呤， D‑天门冬氨 酸， 丙酮酸， 牛磺酸， 1 ‑油烯基 甘油， L‑苏糖酸， 马来酰胺酸， DL ‑苹果酸， 维生素C， 柠檬酸， 副黄嘌呤， 14(S) ‑HDHA和L‑丝氨 酸。 5.一种诊断肌张力障碍的试剂盒， 试剂盒中包括2,3 ‑二氨基丙酸， 苯丙氨酰苯丙氨酸， 花生四烯 酸， L‑焦谷氨酸， L‑天门冬氨 酸， L‑谷氨酸， 油酸甘油酯， 次黄嘌 呤， D‑天门冬氨 酸， 丙酮酸， 牛磺酸， 1 ‑油烯基甘油， L ‑苏糖酸， 马来酰胺 酸， DL‑苹果酸， 维生素C柠檬酸， 副黄嘌 呤， 14(S) ‑HDHA和L‑丝氨酸。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115184501 A 2血清代谢物组合筛查在诊断肌张力障碍症中的应用 技术领域 [0001]本发明属于医药生物领域， 涉及血清 代谢组在诊断肌张力障碍症中的应用。 背景技术 [0002]肌张力障碍是一种复杂的高度可变的神经运动障碍综合征， 其特征是持续或间断 的肌肉收缩。 据统计， 肌张力障碍的患病率为10万分之16， 是仅次于原发性震颤和帕金森 病， 第三大最常见 的运动障碍性疾病。 肌张力障碍可以是许多神经系统疾病的表现或者其 它疾病的合并症状， 也可能是孤立性的症状。 孤立性肌张力障碍是除了震颤外， 以肌张力障 碍为唯一表型 的肌张力综合征。 目前， 一些基因被证明与儿童和青少年发病的肌张力障碍 有关， 但大多数常见的成人发病的肌张力障碍患者往 往是偶发的， 没有明确的病因。 [0003]代谢组学是对新陈代谢过程中某一时间所有低分子量代谢产物进行定性和定量 的研究， 以反映生物体对外界刺激或基因修饰所发生的变化的科学。 代谢产物可包括内源 性代谢产 物、 药物代谢物、 环 境化学物质及从肠道菌群产生的化学物质等等。 基因表达和蛋 白质的改变必将产生细胞、 组织、 器官 的代谢变化， 而代谢物是细胞调节过程的最终产物。 代谢组学是继基因组学、 蛋白质组学、 转录组学之后一个新兴的后基因组学的研究领域， 是 系统生物学的重要组成部 分， 具有快速、 高效、 非侵袭性、 高灵敏度和高特异 性的特点。 大量 的研究表明， 代谢组在神经发育以及脑疾病如帕金森(PD)， 阿尔茨海默病(AD)和多发性硬 化症中扮演着重要角色。 代谢标记物,为疾病的早期诊断、 治疗提供了重要的参考。 目前， 代 谢组与肌张力障碍之间的关系尚处于未知。 代谢组学为探索疾病的生物标记物， 为发现疾 病的早期诊断、 有效的治疗 靶点提供了重要的研究工具。 发明内容 [0004]本发明首先利用基于气相色谱 ‑质谱联用技术(GS ‑MS)的非靶向代谢组学技术合 计鉴定出1768个特征性物质， 然后， 采用偏最小二乘回归分析鉴定出了肌张力障碍患者血 清中242个代谢物水平与健康人有显著差异(p<0.05,VIP>1and  FC>2or<0.5)。 利用人类代 谢组数据库进一步的分析发现， 其中的44个代谢物(表1.)在数据库中得到可靠注释和命 名， 并作为进一步研究 的肌张力障碍的重点代谢物及组合。 这些代谢物的鉴定和发现， 为进 一步研究发现肌张力障碍患者 生物标记 物， 有效的治疗 靶点提供了重要的参 考。 [0005]本发明的目的在于提供检测血清代谢物水平的试剂在制备诊断肌张力障碍的试 剂盒中的应用， 其中所述血清 代谢物包括： [0006]2,3‑二氨基丙酸， 苯丙氨酰苯丙氨酸， 花生四烯酸， L ‑焦谷氨酸， L ‑天门冬氨酸， L ‑ 谷氨酸， 油酸甘油酯， 次黄嘌呤， D ‑天门冬氨酸， 丙酮酸， 牛磺酸， 1 ‑油烯基甘油， L ‑苏糖酸， 马来酰胺酸， DL ‑苹果酸， 维生素C， 柠檬酸， 副黄嘌呤， 14(S) ‑HDHA和L‑丝氨酸等(表1.)。 [0007]本发明检测血清 代谢物水平的方法为基于GC ‑MS的非靶向代谢组学的方法。 [0008]本发明的另一个目的在于提供一种诊断肌张力障碍的产品， 该产品包括检测血清 代谢物水平的试剂， 其中所述血清 代谢物包括：说　明　书 1/5 页 3 CN 115184501 A 3