(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211080689.4 (22)申请日 2022.09.05 (71)申请人 山西农业大 学 地址 030801 山西省晋中市太 谷区铭贤南 路1号 (72)发明人 闫喜中　邓彩萍　马力　郝赤　 杨春　 (74)专利代理 机构 成都方圆聿联专利代理事务 所(普通合伙) 51241 专利代理师 苟铭 (51)Int.Cl. A01N 27/00(2006.01) A01P 17/00(2006.01) G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01)G01N 30/64(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 薄荷中对小菜蛾具有驱避活性的挥发性物 质 (57)摘要 本发明公开了薄荷中对小菜蛾具有驱避活 性的挥发性物质， 包 括： 2,4‑二甲基庚烷， 4 ‑甲基 辛烷和2甲基壬烷对小菜蛾成虫有趋避作用。 通 过检测发现， 2,4 ‑二甲基庚烷、 4 ‑甲基辛烷、 2 ‑甲 基壬烷分别从10μg/μL、 100μg/μL、 1μg/μL 的剂量开始引发雌性触角的强烈剂量依赖性EAG 反应。 利用Y型管嗅觉仪测试了交配后雌性小菜 蛾成虫对3种EAD活性化合物不同浓度下的行为 反应， 浓度为100μg/μL的2,4 ‑二甲基庚烷、 4 ‑ 甲基辛烷和2 ‑甲基壬烷对雌性小菜蛾有着极显 著的驱避作用， 驱避指数分别为60.0％、 63.3％ 和70.0％。 浓度为100μg/μL的2,4 ‑二甲基庚 烷、 4‑甲基辛烷和2 ‑甲基壬烷在对雌性小菜蛾成 虫的产卵选择有显著的排斥作用。 3种活性化合 物可以作为驱避剂用于小 菜蛾的防治工作中。 权利要求书3页 说明书8页 附图4页 CN 115462374 A 2022.12.13 CN 115462374 A 1.薄荷中对小菜蛾具有驱避活性的挥发性物质， 包括： 2,4‑二甲基庚烷， 4 ‑甲基辛烷和2甲基壬 烷。 2.一种检测如权利要求1所述挥发性物质的方法， 包括： (1)顶空收集薄荷挥发物 将新鲜薄荷植株的地上部分进行机械损伤后置入干净的250ml广口瓶中， 用带有进气 管和出气管的干净硅胶 塞将广口瓶塞紧， 将20mg吸附剂Porapak  Q装入采样管中； 用硅胶管 分别将大气采样仪、 活性炭 管、 变色硅胶管、 玻璃转子流量计、 广口瓶、 玻璃 转子流量计顺序 连接， 检查装置气密性良好后， 将大气采样 仪流量设置为350ml/min， 抽气15min将广口瓶内 原有气体排尽后， 将采样管连接在广口瓶出气端与流量计之间， 再次检查装置气密性良好 后正式进 行顶空收集破损薄荷挥发物， 收集完成后 将吸附有薄荷挥发物的吸附剂 于常温下 用二氯甲烷dic hloromethane进行洗脱， 洗脱液 ‑20℃保存； (2)GC‑EAD分析 洗脱液采取不分流进样， 每次进样量为2μL， 溶剂延迟3min， 检测器温度300℃， 进样口 温度250℃， 载气为高纯度氦气， 流速1.5mL/min， 选取2 ‑3日龄的活跃小菜蛾 雌性成虫， 准备 两根长度为4 ‑5cm、 末端整齐且一端拉尖的玻璃毛细管， 一根玻璃管作为测量极， 其尖部比 昆虫触角端部稍粗， 另一根玻璃管作为参考极， 将两根玻璃毛细管吸入现配的Ringer生理 盐水至距离尾部2 ‑3mm； 同时， 准备两根长度为4.5cm的干净银丝作为电极丝， 将电极丝从玻 璃电极夹持器尾部插入， 电极丝末端折弯约2mm 并稳定到夹持器尾部， 然后将电极丝尖端从 准备好的玻璃毛细管端部插入， 最后将两个玻璃电极夹持器分别固定到PRG ‑3电极的测量 极和参考极； 准备 活性良好的成虫， 在解剖镜手术刀迅速的从触角基部切下触角， 并将 触角 端部切开一点， 取下PRG ‑3电极的参考极， 依靠生理盐水的表面张力将触角基部吸住， 然后 将参考极固定， 同时在体视显微镜下将触角端部与测量极相连， 通过GC ‑EAD软件记录和分 析数据， GC‑EAD试验重复进行5次； (3)GC‑MS分析 洗脱液采取不分流进样， 每次进样量为2μL； 溶剂延迟3min， 检测器温度300℃， 进样口 温度250℃， 载气为高纯度氦气， 流速1.5mL/min， 四级杆 150℃， 离子源温度 250℃， 电离方式 EI， 质谱轰击电压为70eV， 扫描质量范围为45 ‑500m/z， 扫描频率为5/s； 通过气相色谱 ‑质谱 联用仪所连接计算机的NISTO8谱库并参考标准图谱对全部检索结果进行核对补充检索来 进行损伤薄荷挥发性成分的定性分析， 试验重复进行3次； (4)小菜蛾成虫对3种标准挥发物的触角电位反应 将装有10μl待测溶液的洁净滤纸条置于巴斯德管中， 并用封口膜将管口两端封住， 将 装有10μl石蜡油的洁净滤纸条置于巴斯德管中作为对照， 同样用封口膜将管口两端封住； 取冻晕菜蛾成虫一只， 在体视显微镜下用手术刀从小菜蛾成虫触角基部切下， 并切除触角 端部的2‑3个鞭节， 再用导电胶将处理好的触角两端分别连接在参考电极和记录电极上， 气 流系统由气流分配仪控制； 试验时每只触角按对照石蜡油、 待测溶液浓度由低到高、 对照石 蜡油的顺序进行刺激， 雌、 雄成虫 各重复进行6次试验； (5)小菜蛾成虫对3种标准挥发物的Y型嗅觉 仪反应 Y型嗅觉仪的Y形管主臂长20cm， 内径2.5cm， 两侧臂长均为15cm， 内径2.5cm， 侧壁之间 夹角75°， 将装有10 μl待测溶液的洁净滤纸条置于Y形管一个侧臂上， 另一个侧臂以装有10 μ权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115462374 A 2l石蜡油的洁净滤纸条作为对照， 气味源连接QC ‑1B型大气采样 仪， 将单头成虫释放至Y形管 的主臂基部， 每头小菜蛾成虫测试5min， 将小菜蛾成虫进入 试验臂10cm以上且停留超过30 s 记为选择试验组， 将小菜蛾成虫进入对照臂10cm以上且停留超 过30s视为选择对照组， 若成 虫放入5min仍未做出选择， 则视为不反应； 每头成虫只测试一次， 每10头雌虫或雄虫为一 组， 重复3组； 每测试5头虫子， 调换Y形管两臂位置， 每测试一组， 用酒精彻底清洗Y形管； 每 天测试完成后用丙酮清洗 Y形管、 洗气瓶与连接 硅胶管； (6)小菜蛾成虫对3种标准挥发物的产卵忌避反应 将100 μL的浓度为100 μg/ μl的标准化合物置于橡胶头诱芯载体中， 将100 μl石蜡油置于 诱芯作为对照， 在养虫笼中进行实验， 选择四株健康且完整的盆栽寄主植株小白菜 B.chinensis分别放置在网笼的四个角， 并且各个笼子以10m的间隔间隔开， 以避免相互干 扰； 吸取100 μL浓度为100 μg/ μL的待测溶剂加 入橡胶塞中， 制备为味源； 在第1组的网笼中， 选择其中一条对角线 上的两株小白菜， 将两个味源橡 皮塞分别固定在植株上， 作为 实验组； 在另一条对角线上 的两株植物固定上含石蜡油橡皮塞， 作为对照组； 每个笼子释放3对2日 龄雌雄成虫， 24h后统计 每株小白菜上的卵数； (7)数据分析 试验数据使用IBM  SPSS Statistics  21.0软件进行统计分析， 所有结果均表示为平均 值±SEM， 采用单因素方差分析中的Tukey ’s multiple  range test检验EAG反应值之间的 显著性； 通过卡方检验比较了Y型嗅觉仪生物测定数据的显着差异， 使用单 因素方差 分析中 的Tukey’s multiple  range test检验分析产卵驱避指数， 统计学显着性设定为P< 0.05。 3.根据权利要求2所述的检测方法， 其中： 步骤(1)所述 新鲜薄荷植株装至广口瓶的2/ 5处； 所述吸附剂于试验前分别用3ml丙酮aceto ne， 3ml甲醇 methanol进行淋洗 激活； 所述顶空收集破损薄荷挥发物的时间为5小时； 所述收集完成后将吸附有薄荷挥 发物的吸附剂于常温下用二 氯甲烷dichloromethane 进行洗脱， 每次3 00 μl， 淋洗 5次。 4.根据权利要求2所述的检测方法， 其中： 步骤(2)所述气相色谱 ‑触角电位联用仪色谱柱为HP ‑5MS毛细管柱， 规格为长 ×内径× 膜厚＝30m×0.25mm×0.25 μm； 所述柱升温程序： 初始值50℃保持2min， 然后以4℃/min的速度升温到120℃保持2min， 再以20℃/mi n升温到25 0℃保持4mi n， 共运行32mi n； 所述GC‑EAD试验时间段为17:0 0‑22:00。 5.根据权利要求2所述的检测方法， 其中： 步骤(3)所述气相色谱 ‑质谱联用仪(GC ‑MS)型号为Trace1300， 色谱柱为VF ‑5MS毛细管 柱， 规格为长 ×内径×膜厚＝30m×0.25mm×0.25 μm； 所述柱升温程序： 初始值50℃保持2min， 然后以4℃/min的速度升温到120℃保持2min， 再以20℃/mi n升温到25 0℃保持4mi n， 共运行32mi n。 6.根据权利要求2所述的检测方法， 其中： 步骤(4)所述刺激时间为0.5s， 两次刺激时间 间隔30s以上； 所述EAG试验时间段为17:0 0‑22:00。权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115462374 A 3