(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211062931.5 (22)申请日 2022.08.31 (71)申请人 内蒙古帕默康创医疗仪 器有限公司 地址 010000 内蒙古自治区呼和浩特市和 林格尔县盛乐经济园区科技大道1号 (72)发明人 李效宽　贺宇　 (74)专利代理 机构 内蒙古泓涵知识产权代理事 务所(普通 合伙) 15111 专利代理师 贺希格玛 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/08(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 苯妥英钠血 药浓度检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种苯妥英钠血药浓度检测 方法， 采用二维液相色谱仪系统， 包括以下步骤： S1制备溶液， 溶液包括空白血浆溶液、 标准溶液、 系统适用性溶液和供试品溶液； S2设置色谱参 数， 一维柱色谱条件的参数为： 填充剂为亲水性 的固相萃取柱； 一维洗脱液包括甲醇和水， 一维 洗脱方式为梯度洗脱； 二维柱色谱条件的参数 为： 二维柱是色谱柱， 二维洗脱液包括甲醇和水， 二维洗脱方式为等度洗脱； S3实施检测， 将标准 溶液和供试品溶液注入二维液相色谱仪系统并 记录典型谱 图； S4定量分析， 绘制苯妥英钠的标 准曲线， 计算得到供试品溶液中苯妥英钠的含 量。 本发明具有操作简单、 专属性强、 灵敏度高、 线性范围宽、 准确度高等优点。 权利要求书2页 说明书8页 附图4页 CN 115326989 A 2022.11.11 CN 115326989 A 1.一种苯妥英钠血药浓度检测方法， 采用二维液相色谱仪系统， 其特征在于， 包括以下 步骤： S1、 制备溶液 所述溶液包括由正常人空白血浆制得的空白血浆溶液、 含有苯妥英钠的标准溶液、 混 合有苯妥英钠和正常人 空白血浆的系统适用性溶液、 由正在进行苯妥英钠治疗的患者的血 浆制得的供 试品溶液； S2、 设置色谱参数 在所述二维液相色谱仪系统上设置一维柱色谱条件的参数、 二维柱色谱条件的参数、 大体积进样条件的参数和阀切换条件的参数， 并使用所述空白血浆溶液和所述系统适用性 溶液确认， 其中 所述一维柱色谱条件的参数为： 一维柱是填充剂为亲 水性聚氧乙烯和疏 水基的苯基以一定比例键合的固相萃取柱； 一维洗脱液包括一维流动相A和一维流动相B， 所述一维流动相A为甲醇， 所述一维流动 相B为水； 一维洗脱方式为梯度洗脱； 所述二维柱色谱条件的参数为： 二维柱是填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱； 二维洗脱液包括二维流动相A和二维流动相B， 所述二维流动相A为甲醇， 所述二维流动 相B为水； 二维洗脱方式为 等度洗脱； S3、 实施检测 将所述供试品溶液和不同体积的所述标准溶液分别注入所述二维液相色谱仪系统， 并 记录典型谱图； S4、 定量分析 分析得到不同质量浓度 下的苯妥英钠各自对应的苯妥英钠图谱的峰面积， 绘制苯妥英 钠的标准 曲线， 分析得到供试品溶液对应的苯妥英钠的峰面积， 计算得到供试品溶液中苯 妥英钠的含量。 2.根据权利要求1中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 所述一维流动相 A甲醇在一维洗脱液中的体积占比不低于10％且不高于80％。 3.根据权利要求2中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 所述一维洗脱液 以0.2mL/min ‑1.5mL/min的流速流经温度范围为20℃ ‑35℃的所述一维柱， 以富集纯化样品 中的苯妥英钠。 4.根据权利要求3 中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 所述一维洗脱液 的梯度洗脱程序为： 0min‑6.5min， 流速为0.2mL/mi n， 一维流动相A甲醇： 一维流动相B水的体积比为1： 9； 6.5min‑7.0min， 流速升高至1.5mL/min， 一维流动相A甲醇： 一维流动相B水的体积比改 变为8： 2； 7.0min‑9.0min， 流速维持在1.5mL/min， 一维流动相A甲醇： 一维流动相B水的体积比维 持在8： 2；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115326989 A 29.0min‑9.2min， 流速维持在1.5mL/min， 一维流动相A甲醇： 一维流动相B水的体积比改 变为1： 9； 9.2min‑11.0min， 流速维持在1.5mL/min， 一维流动相A甲醇： 一维流动相B水的体积比 维持在1： 9； 11.0min‑11.5min， 流速下降至0.2 mL/min， 一维流动相A甲醇： 一维流动相B水的体积比 维持在1： 9； 11.5min‑15min， 流速维持在0.2 mL/min， 一维流动相A甲醇： 一维流动相B水的体积比维 持在1： 9。 5.根据权利要求4中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 在一维洗脱时， 为一维洗脱液注入水进行稀释， 注水稀释程序为： 0min ‑3min， 水的流速为1.2mL/min； 3min ‑ 3.1min， 水的流速下降至0.1mL/min； 3.1min ‑14.5min， 水的流速保持在0.1mL/min； 14.5min‑14.8min， 水的流速上升至1.2mL/min； 14.8min ‑15min， 水的流速保持在1.2mL/ min。 6.根据权利要求1中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 所述二维洗脱液 以0.8mL/min ‑1.2mL/min的流速流经温度范围为20 ‑35℃的所述二维柱， 以分离和定量分析 苯妥英钠。 7.根据权利要求6 中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 所述二维洗脱液 中所述二维流动相A甲醇： 二维流动相B水的体积比为73:27。 8.根据权利要求7中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 所述等度洗脱程 序为0min‑15min， 流速为1.0mL/mi n。 9.根据权利要求1中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 所述大体积进样 条件的参数为20 0 μL。 10.根据权利要求1中所述的苯妥英钠血药浓度检测方法， 其特征在于， 所述一维柱为 MF Ph‑1 S‑5固定萃取柱， 规格为4.0mml.D. ×10mm； 所述二维柱为AcclaimTM120 C18色谱 柱， 规格为25 0×4.6mm， 5 μm。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115326989 A 3