(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210551454.2 (22)申请日 2022.05.20 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO: M 202 2201 2022.03.04 (71)申请人 四川师范大学 地址 610066 四川省成 都市锦江区静安路5 号 (72)发明人 赵甲元　刘珊　蒋杨丹　廖颖　 林昊然　谢宇宣　刘刚　 (74)专利代理 机构 成都科海专利事务有限责任 公司 51202 专利代理师 黄幼陵 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) A61K 35/742(2015.01)A61P 39/02(2006.01) C12R 1/085(2006.01) (54)发明名称 蜡样芽孢杆菌菌剂及在消除动物体内氯氰 菊酯中的应用 (57)摘要 本发明所述蜡样 芽孢杆菌菌剂， 含有蜡样 芽 孢杆菌(Bacillus  cereus)GW ‑01。 所述蜡样芽孢 杆菌(Bacillus  cereus)GW ‑01， 由绵羊瘤胃食糜 分离得到， 保藏号为CCTCC  NO： M2022201。 蜡样芽 孢杆菌菌剂的制备方法， 步骤如下： (1)菌种活 化； (2)初级种子液制备； (3)菌种的扩大培养； (4)菌泥和菌剂的制备。 实验表明， 本发明所述蜡 样芽孢杆菌菌剂对动物健康无不良影 响， 对动物 体内残留的氯氰菊酯具有显著的消除效果。 将本 发明所述蜡样芽孢杆菌菌剂在消除动物体内氯 氰菊酯中应用， 可减少动物体内残留的氯氰菊酯 及其它食物所含的氯氰菊酯通过食物链进入人 体， 减轻对人体健康的损害。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图4页 CN 115141764 A 2022.10.04 CN 115141764 A 1.蜡样芽孢杆菌(Baci llus cereus)GW ‑01， 其保藏 号为CCTCC NO： M 2022201。 2.蜡样芽孢杆菌菌剂， 其特征在于含有权利要求1所述蜡样芽孢杆菌(Bacillus   cereus)GW ‑01。 3.根据权利要求2所述蜡样芽孢杆菌菌剂， 其特征在于包括蜡样芽孢杆菌菌粉、 蜡样芽 孢杆菌胶囊或蜡样芽孢杆菌片 剂。 4.权利要求2或3所述 蜡样芽孢杆菌 菌剂的制备 方法， 其特 征在于步骤如下： (1)菌种活化 将蜡样芽孢杆菌(Bacillus  cereus)GW ‑01接种于LB固体培养基中进行培养， 获得蜡样 芽孢杆菌 菌株单菌落； (2)初级种子液制备 将步骤(1)所得蜡样芽孢杆菌菌株单菌落接种于LB液体培养基并放入转动的培养箱中 进行培养， 得到蜡样芽孢杆菌的初级种子液； (3)菌种的扩大培 养 将步骤(2)中所得蜡样芽孢杆菌的初级种子液接种于LB液体培养基并放入转动的培养 箱中进行培 养， 得到含蜡样芽孢杆菌的培 养液； (4)菌泥和菌剂的制备 将步骤(3)所述培养液进行离心并收集菌体， 然后用无菌生理盐水洗涤菌体， 再离心去 上清， 得到含蜡样芽孢杆菌(Bacillus  cereus)GW ‑01的菌泥； 将所述菌泥进行冷冻干燥， 即 得到蜡样芽孢杆菌菌粉； 将所述菌粉进行胶囊灌装得到蜡样芽孢杆菌胶囊； 将所述菌粉进 行片剂压制得蜡样芽孢杆菌片 剂。 5.根据权利要求4所述蜡样芽孢杆菌菌剂的制备方法， 其特征在于步骤(1)中的培养温 度为35～37℃、 培 养时间为18～ 24h。 6.根据权利要求4或5所述蜡样芽孢杆菌菌剂的制备方法， 其特征在于步骤(2)中， 蜡样 芽孢杆菌菌株单菌落的接种量为1.5～2环， 培养温度为35～37℃、 培养时间为18～24h， 培 养箱的转速为13 0～150rmp/min。 7.根据权利要求4或5所述蜡样芽孢杆菌菌剂的制备方法， 其特征在于步骤(3)中， 接种 时蜡样芽孢杆菌的初级种子液与LB液体培养基的体积比为2～3： 100， 培养温度为35～37 ℃、 培养时间为24～48h， 培 养箱的转速为13 0～150rmp/min。 8.根据权利要求6所述蜡样芽孢杆菌菌剂的制备方法， 其特征在于步骤(3)中， 接种时 蜡样芽孢杆菌的初级种子液与LB液体培养基的体积比为2～3： 100， 培养温度为35～37℃、 培养时间为24～48h， 培 养箱的转速为13 0～150rmp/min。 9.权利要求2或3所述 蜡样芽孢杆菌 菌剂在消除动物体内 氯氰菊酯中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141764 A 2蜡样芽孢杆菌 菌剂及在消除动物体 内氯氰菊酯中的应用 技术领域 [0001]本发明属于微生物开发和应用领域， 特别涉及一种蜡样芽孢杆菌菌剂及其在消除 动物体内 氯氰菊酯中的应用。 背景技术 [0002]近年来， 随着有机氯和有机磷杀虫剂的部分或全部禁用， 拟除虫菊酯类农药的使 用量已经占据世界杀虫剂市场的30％。 拟除虫菊酯通过开放钠离子通道， 实现杀虫目的， 因 其高效的杀虫能力， 使其在农林业生产中发挥重要作用。 氯氰菊酯是一种使用最为广泛的 拟除虫菊酯类农药， 随着其大范围大量使用， 导致在茶叶、 果蔬、 河流和土壤中残留超标的 负面影响被不断报道。 动物在养殖过程中由于饮水、 饲料、 圈舍杀虫剂喷洒等问题， 杀虫剂 往往会在脂肪层中积累， 导致动物源性残留物， 如肉类、 鱼类、 脂肪、 内脏、 鸡蛋和牛奶。 残留 的氯氰菊酯会通过食物链进入人体， 其代谢产物在人体尿液、 母乳中普遍检出， 其对人体神 经系统、 生殖系统造成毒性作用， 可能引起血液癌症、 氧化应激及DNA损伤等危害。 近来， 由 于在动物源性食品中检测出有拟除虫氯氰菊酯类、 有机磷类等农药 的残留， 动物源性食品 对人体的健康和 生态环境安全问题也引起了全球的关注。 因此， 如何消除动物体内残留的 氯氰菊酯， 是亟 待解决的问题。 发明内容 [0003]本发明的目的在于提供一种蜡样芽孢杆菌菌剂及该菌剂在消除动物体内氯氰菊 酯中应用， 以减少动物体内残留的氯氰菊酯及其它食物所含的氯氰菊酯通过食物链进入人 体造成对人体健康的损害。 [0004]本发明所述蜡样芽孢杆菌菌剂， 含有蜡样芽孢杆菌(Bacillus  cereus)GW ‑01。 所 述蜡样芽孢杆菌(Bacillus  cereus)GW ‑01， 由绵羊瘤胃食糜分离得到， 于2022年3月4日送 交中国典型培 养物保藏中心保藏， 保藏 号为CCTCC NO： M 2022201。 [0005]本发明所述蜡样芽孢杆菌菌剂， 包括蜡样芽孢杆菌菌粉、 蜡样芽孢杆菌胶囊或蜡 样芽孢杆菌片 剂。 [0006]本发明所述 蜡样芽孢杆菌 菌剂的制备 方法， 步骤如下： [0007](1)菌种活化 [0008]将蜡样芽孢 杆菌(Bacillus  cereus)GW ‑01接种于LB固体培养基中进行培养， 获得 蜡样芽孢杆菌 菌株单菌落； [0009](2)初级种子液制备 [0010]将步骤(1)所得蜡样芽孢杆菌菌株单菌落接种于LB液体培养基并放入转动的培养 箱中进行培 养， 得到蜡样芽孢杆菌的初级种子液； [0011](3)菌种的扩大培 养 [0012]将步骤(2)中所得蜡样芽孢杆菌的初级种子液接种于LB液体培养基并放入转动的 培养箱中进行培 养， 得到含蜡样芽孢杆菌的培 养液；说　明　书 1/5 页 3 CN 115141764 A 3