(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210569201.8 (22)申请日 2022.05.24 (71)申请人 河南金大众生物工程有限公司 地址 454950 河南省焦作市武陟县詹店新 区汇金大道1号 申请人 河南省巴饲福微 生物技术研究院 (72)发明人 贾培培　陈冠珠　郭灿　张永钦　 申艳敏　陈占省　 (74)专利代理 机构 广州博联知识产权代理有限 公司 44663 专利代理师 王洪江 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种凝结芽孢杆菌快速 筛选鉴定方法 (57)摘要 本发明提供一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴 定方法， 包括以下步骤： S1)、 称取 1g样品于100mL 带有玻璃珠的无菌生理盐水中制成初始菌悬液； S2)、 初始 菌悬液在恒温振荡器中充分震荡； S3)、 震荡后将初始菌悬液进行梯度稀释 至合适浓度， 并置于80℃水浴锅中水浴10min， 去除不耐热的 乳酸菌、 酵母菌； S4)、 将混浮液涂布在显色培养 基平皿上， 倒置于40 ‑45℃恒温培箱内培养一段 时间后观察菌落形态； S5)、 24h后有黄色晕圈的 菌落即为凝结芽孢杆菌。 本发明针对凝结芽孢杆 菌既能产芽孢， 抗逆性强， 又能产酸， 生长缓慢的 特点， 从而快速准确的筛选鉴定出凝结芽孢杆 菌。 权利要求书1页 说明书2页 附图3页 CN 115044499 A 2022.09.13 CN 115044499 A 1.一种凝结芽孢杆菌快速 筛选鉴定方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1)、 称取1g样品于10 0mL带有玻璃珠的无菌生理盐水中制成初始菌悬 液； S2)、 初始菌悬 液在恒温振荡器中充分震荡； S3)、 震荡后将初始菌悬液进行梯度稀释至合适浓度， 并置于80℃水浴锅中水浴10min， 去除不耐热的乳酸菌、 酵母菌； S4)、 将混浮液涂布在显色培养基平皿上， 倒置于40 ‑45℃恒温培箱内培养一段时间后 观察菌落形态； 其中， 所述的显色培养基包括按质量百分比计的如下组分： 胰蛋白胨1％、 酵母浸粉 0.3％， 葡萄糖0.5％， L ‑半胱氨酸0.05％， 溴甲酚紫0.004％， 吐温80  0.1％ml， ， 琼脂1.8％， 余量为去离子水； S5)、 24h后有黄色晕圈的菌落即为凝结芽孢杆菌 。 2.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方法， 其特征在于： 步骤S1) 中， 所述的生理盐水的浓度为0.85％。 3.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方法， 其特征在于： 步骤S1) 中， 所述的玻璃珠直径为3 ‑5mm。 4.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方法， 其特征在于： 步骤S2) 中， 所述的恒温振荡器的温度为 40‑45℃， 转速为25 0rpm， 震荡时间为20 ‑30min。 5.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方法， 其特征在于： 步骤S4) 中， 所述的显色培 养需基于1 15℃灭菌 30min。 6.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方法， 其特征在于： 步骤S4) 中， 所述的显色培 养基凝固后颜色为青色。 7.根据权利要求1所述的一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方法， 其特征在于： 步骤S4) 中， 所述的混浮液涂布量 为100uL， 且培 养时间为24 ‑36h。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115044499 A 2一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方 法 技术领域 [0001]本发明涉及连接器技 术领域， 尤其是一种凝结芽孢杆菌快速 筛选鉴定方法。 背景技术 [0002]凝结芽孢杆菌(Bacillus  coagulans)， 革兰氏阳性菌， 端生芽孢， 无鞭毛。 分解糖 类生成L‑乳酸， 为同型乳酸发酵菌。 由于具有多种生物学功能且安全无毒， 2013年正式录入 《中国饲料添加剂品种目录》 。 凝结芽孢杆菌不仅具有乳酸菌产酸的特性， 又具有芽孢杆菌 耐高温、 抗逆性强和耐储存的优点， 成为益生菌行业的新秀， 广泛应用于医疗、 保健、 食品、 畜禽及水产养殖等领域。 [0003]凝结芽孢杆菌的开发， 关键技术在于菌种筛选鉴定， 从什么途径、 用什么方法筛选 鉴定出目标菌株。 现有技术多是根据形态学， 生理生化特性特性结合分子生物学手段进行 鉴定。 筛选过程繁琐， 不 易有结果， 且分子手段存在价格昂贵， 人员要求高等 缺陷。 发明内容 [0004]针对现有技术的不足， 本发明提供一种凝结芽孢杆菌快速筛选鉴定方法， 本发明 解决现有筛 选鉴定方法时间长价格高的问题。 [0005]本发明的技 术方案为： 一种凝结芽孢杆菌快速 筛选鉴定方法， 包括以下步骤： [0006]S1)、 称取1g样品于10 0mL带有玻璃珠的无菌生理盐水中制成初始菌悬 液； [0007]S2)、 初始菌悬 液在恒温振荡器中充分震荡； [0008]S3)、 震荡后将初始菌悬液进行梯度稀释至合适浓度， 并置于80℃水浴锅中水浴 10min， 去除不耐热的乳酸菌、 酵母菌； [0009]S4)、 将混浮液涂布在显色培养基平皿上， 倒置于40 ‑45℃恒温培箱内培养一段时 间后观察菌落形态； [0010]S5)、 24h后有黄色晕圈的菌落即为凝结芽孢杆菌 。 [0011]作为优选的， 步骤S1)中， 所述的生理盐水的浓度为0.85％。 [0012]作为优选的， 步骤S1)中， 所述的玻璃珠直径为3 ‑5mm。 [0013]作为优选的， 步骤S2)中， 所述的恒温振荡器的温度为40 ‑45℃， 转速为250rpm， 震 荡时间为20 ‑30min。 [0014]作为优选的， 步骤S4)中， 所述的显色培养基包括按质量百分比计的如下组分： 胰 蛋白胨1％、 酵母浸粉0.3％， 葡萄糖0.5％， L ‑半胱氨酸0.05％， 溴甲酚紫0.004％， 吐温80   0.1％ml， 琼脂1.8％， 余 量为去离子水。 [0015]作为优选的， 步骤S4)中， 所述的显色培 养需基于1 15℃灭菌 30min。 [0016]作为优选的， 步骤S4)中， 所述的显色培 养基凝固后颜色为青色。 [0017]作为优选的， 步骤S4)中， 所述的混浮液涂布量 为100uL， 且培 养时间为24 ‑36h。 [0018]本发明的有益效果 为： [0019]1、 本发明针对凝结芽孢杆菌既能产芽孢， 抗逆性强， 又能产酸， 生长缓慢的特点，说　明　书 1/2 页 3 CN 115044499 A 3