(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210571683.0 (22)申请日 2022.05.24 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114887273 A (43)申请公布日 2022.08.12 (73)专利权人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 林道辉　吴婷　郑天颖　戴筠卜　 (74)专利代理 机构 杭州求是专利事务所有限公 司 33200 专利代理师 邱启旺 (51)Int.Cl. A62D 3/02(2007.01) C12N 1/20(2006.01)C12R 1/38(2006.01) A62D 101/22(2007.01) 审查员 郭晨 (54)发明名称 纳米零价铁促进假单胞菌JD37 降解多氯联 苯的方法及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种纳米零价铁促进假单胞 菌JD37降解多氯联苯的方法及其应用。 本发明是 在存在多氯联苯的环境中加入纳米零价铁和假 单胞菌JD3 7， 通过纳米零价铁促进 假单胞菌JD3 7 降解多氯联苯。 通过纳米零价铁提高假单胞菌 JD37胞外代谢产生的活性氧含量， 促进多氯联苯 降解。 因此， 本发明适合在水体和土壤中降解多 氯联苯， 进行环境 修复。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 114887273 B 2022.12.16 CN 114887273 B 1.一种纳米零价铁促进假单胞菌JD37降解多氯联苯的方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： 在存在多氯联苯的环境中加入纳米零价铁和假单胞菌 （ Pseudomonas  chlororaphis   subsp. aurantiaca ） JD37， 所述假单胞菌JD37保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心， 保藏编号 为CGMCC No. 1.10967， 通过纳米零 价铁促进假单 胞菌JD37降解多氯联 苯； 所述环境包括水体和土壤； 所述假单胞菌JD37是处于对数增长期中后期的假单胞菌JD37， 其通过如 下步骤制备得 到： 将假单胞菌JD37菌种接种至经除菌后的液体培养基中， 振荡培养至菌体处于对数增长 期中后期； 所述纳米零价铁的用量为： 当所述的环境为水体时， 按10~100 mg/L的量添加纳米零价 铁； 所述假单胞菌JD37的OD600值为： 当所述的环境为水体时， 假单胞菌JD37的OD600值为0.1 ~0.3； 所述的存在多氯联 苯的环境中多氯联 苯的含量 为0.01~1.0 mg/L； 所述纳米零价铁 的用量为： 当所述的环境为土壤时， 按10~1000 mg/L的量添加纳米零 价铁。 2.根据权利要求1所述的纳米零价铁促进假单胞菌JD37降解多氯联苯的方法， 其特征 在于， 所述纳米零 价铁的尺寸 为20~100 nm。 3.根据权利要求2所述的纳米零价铁促进假单胞菌JD37降解多氯联苯的方法， 其特征 在于， 所述液体培养基的组成如下： 5~10 g/L胰蛋白胨， 2~5 g/L酵母提取物， 5~10 g/L氯化 钠， 溶剂为水， pH为6.5~7.5； 所述的振荡培 养的条件为： 于28~30 ºC、 150~200 rpm的转速 培养12~18 h。 4.权利要求1 ‑3任一项所述纳米零价铁促进假单胞菌JD37降解多氯联苯的方法在环境 修复中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114887273 B 2纳米零价铁促进假单胞菌JD37降解多氯联苯 的方法及其应用 技术领域 [0001]本发明属于环境生物技术领域， 尤其涉及一种纳 米零价铁促进假单胞菌JD37降解 多氯联苯的方法及其应用。 背景技术 [0002]多氯联苯(Polychlorinated  biphenyls， P CBs)是一类合成有机氯化合物， 化学通 式为C12H10‑nCln。 根据联苯环上的氯原子取代数量和位置， 共有209种同系物。 PCBs化学性质 十分稳定， 在环境中很难被降解， 是典型的持久性有机污染物。 由于PCBs对鱼类、 哺乳动物 和人类具有潜在危害， 国际癌症研究机构将其列为第一类人类致癌物。 2001年5月22日颁布 的 《斯德哥尔摩公约》 将PCBs列为持久性有机 污染物。 [0003]为了解决多氯联苯污 染问题， 相关学者已提出许多修复方案， 包括物理修复、 化学 修复和生物修复。 物理修复方法(包括安全填埋法和热脱附法等)和化学修复方法(包括氧 化技术和还原 技术等)工艺简单、 可操作性 强， 但会产生二次污染， 严重破坏生态系统功能， 不利于后续的环境恢复。 生物修复的目的是通过植物、 动物和微生物的直接作用来清除环 境污染物， 属于更经济友好的技术。 然而， 由于生物降解或生物积累的生理限制， 生物修复 的修复效率低、 修复周期 长。 总的来说， 缩短污染环境修复周期的同时保护自然环境的生态 功能显得十分重要。 [0004]植物根际促生菌(Plant  growth promoting rhizobacter ia， PGPR)是自由生活在 土壤或附生于植物根系的一类可促进植物生长及其对矿质营养的吸收和利用， 并能抑制有 害生物的有益菌类。 假单胞菌(Pseudomonas)是其中的典型代表， 其生物防治机理是通过分 泌抗病物质(吩嗪类、 硝吡咯菌素、 喹诺酮类等)代谢产生胞外活性氧(Reactive  oxygen  species,ROS)抑制植物病原菌， 控制植物病虫害。 微生物代谢产生胞外ROS， 可加速难降解 有机物的生物降解。 目前， 该过程对修复有机污染环境的作用较少被研究或报道。 而且， 铁 是生物体必需的营养元素， 参与植物及微生物的呼吸作用、 光合作用、 抗氧化应激、 激素和 代谢调节等生物化学活动。 纳米零价铁(Nanosc ale zero‑valent iron， nZVI)是环境修复 中备受关注的纳米材料。 相较于其他零价金属如锰(Mn)、 铜(Cu)等， nZVI大规模生产成本较 低且具有环境友好性。 nZVI是由Fe(0)内核和氧化壳层组成的核壳结构， 该结构为污染物的 初始吸附和随后在颗粒表面的还原和/或氧化过程提供了独特的反应界面。 而且， 纳米尺 寸 的铁氧化物具有强吸附能力和催化活性， 可直接去除环境中的污染物。 因此， 有必 要了解铁 基纳米材 料与根际功能菌对PCB28降解过程的影响。 发明内容 [0005]本发明的目的在于针对现有技术的不足， 提供了一种纳米零价铁促进假单胞菌 JD37降解多氯联 苯的方法及其应用。 [0006]本发明的目的是通过以下技术方案来实现的： 第一方面， 本发明提供了一种纳米 零价铁促进假单胞菌JD 37降解多氯联苯的方法， 包括以下步骤： 包括以下步骤： 在存在 多氯说　明　书 1/5 页 3 CN 114887273 B 3