(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210573590.1 (22)申请日 2022.05.24 (66)本国优先权数据 202210433750.2 2022.04.24 CN (83)生物保 藏信息 CGMCC No. 23145 2021.08.16 (71)申请人 北京工商大 学 地址 100048 北京市海淀区阜成路3 3号 (72)发明人 李萌　王昌涛　苏艳凤　付豪　 张永涛　王冬冬　 (74)专利代理 机构 北京箴思知识产权代理有限 公司 11913 专利代理师 谭艳 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01)C12P 19/04(2006.01) C12P 19/00(2006.01) A61K 8/99(2017.01) A61Q 19/08(2006.01) C12R 1/225(2006.01) (54)发明名称 副干酪乳杆菌菌株SS-01、 用该菌株制备的 胞外多糖、 制备方法及应用 (57)摘要 本公开提供了一种保藏编号为CGMCC   No.23145的副干酪乳杆菌(Lactobacillus   paracasei)菌株SS ‑01， 以及由其发酵提取的胞 外多糖， 制备方法包括： 将副干酪乳杆菌SS ‑01经 活化、 纯化、 扩大培养处理所得种子 液接种至MRS 肉汤进行发酵培养处理， 然后灭菌、 分离得到发 酵液上清； 将发酵液上清进行浓缩富集， 再依次 经醇沉、 去蛋白、 醇沉、 冻干处理得到粗胞外多 糖。 该菌株生产的胞外多糖具有良好的抗氧化功 效和安全性， 可以作为功效成分加入到化妆品配 方中， 发酵过程中步骤简便， 操作简单， 能耗较 小， 可以节约成本， 所得 胞外多糖的产量高。 权利要求书1页 说明书13页 序列表2页 附图11页 CN 114736835 A 2022.07.12 CN 114736835 A 1.一种副干酪乳杆菌(Lactobacillus  paracasei)菌株SS ‑01， 其保藏编号为CGMCC   No.23145。 2.一种副干酪乳杆菌胞外多糖的制备 方法， 其特 征在于， 包括： 发酵步骤： 将如权利要求1所述的副干酪乳杆菌SS ‑01经活化、 扩大培养处理所得种子 液接种至 MRS肉汤进行发酵培 养处理， 然后灭菌、 分离得到发酵 液上清； 粗胞外多糖提取步骤： 将所述发酵液上清进行浓缩富集， 再依次经醇沉、 去蛋白、 醇沉、 冻干处理得到粗胞外多糖。 3.如权利要求2所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法， 其特征在于， 所述发酵步骤 中， 所述种子液在600nm处OD值为0.7 ‑1.6， 所述种子液的体积和所述MRS肉汤的体积之比为 5‑30％。 4.如权利要求2或3任一项所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法， 其特征在于， 所 述发酵步骤中， 发酵温度为37 ‑45℃， 摇床转速15 0r/min‑180r/min， 发酵时间为6 ‑27h。 5.如权利要求2 ‑4中任一项所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法， 其特征在于， 所 述粗胞外多糖提取步骤中， 所述发酵液上清浓缩至原体积的10 ‑15％， 首次醇沉处理时， 乙 醇和浓缩后的发酵 液上清体积比4:1 ‑10:1，‑4℃醇沉约12 ‑24h。 6.如权利要求2 ‑5中任一项所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法， 其特征在于， 所 述粗胞外多糖提取步骤中， 所述去蛋白处理包括： 将首次醇沉所得产物用水复溶至样品原 体积， 加入适量木瓜蛋白酶混匀， 室温酶解2 ‑10h后再煮沸失活； 优选地， 所述木瓜蛋白酶添 加量与复溶后体系的体积之比为2 ‑10g/100mL。 7.如权利要求2 ‑6中任一项所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法， 其特征在于， 所 述粗胞外多糖提取步骤之后还 包括： 纯化步骤： 将所述粗胞外多糖经透析处理后， 再通过DEAE ‑52纤维树脂柱层析处理， 即 得所述胞外多糖。 8.如权利要求7所述的副干酪乳杆菌胞外多糖的制备方法， 其特征在于， 所述DEAE ‑52 纤维树脂柱层析处 理中使用水进行洗脱。 9.一种由如权利要求2 ‑8中任一项所述的方法制备的副干酪乳杆菌胞外多糖。 10.一种化妆品， 其特征在于， 所述化妆品以权利要求8所述的干酪乳杆菌胞外多糖为 活性成分之一。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114736835 A 2副干酪乳杆菌 菌株SS‑01、 用该菌株制备的胞外多糖、 制备方 法及应用 技术领域 [0001]本公开属于生物发酵技术领域， 具体涉及副干酪乳杆菌(Lactobacillus   paracasei)菌株S S‑01、 用该菌株制备的胞外多糖、 制备 方法及应用。 背景技术 [0002]干酪乳杆菌(Lactobacillus  casei)是乳酸菌中乳杆菌属的重要成员， 通过调节 肠道菌群失衡改变肠道微生态环境， 增强人体免疫力， 对人体发挥着益生菌的作用。 副干酪 乳杆菌(Lactobacillus  paracasei)是由Collins首次从干酪乳杆菌亚种中划分出来的新 种， 研究发现副干酪乳杆菌的抗氧化 性可能与菌体代谢产物密切相关。 [0003]研究发现乳酸菌代谢产物对皮肤具有有益效能， 具体表现为： 1、 可有效清除DPPH 自由基、 羟自由基， 具有良好的抗氧化能力； 2、 抑制酪氨酸 酶活性， 具有美白活性； 3、 通过人 体保湿功效评价发现， 副干酪乳杆菌具有良好的保湿能力； 4、 通过检测体内炎症因子的表 达发现， 副干酪乳杆菌具有良好的抗炎能力。 [0004]但是， 对于副干酪乳杆菌还有待更深入的研究。 一， 目前只发现副干酪乳杆菌胞外 多糖具有良好的功效， 其他代谢物的活性目前还处于未知； 二， 目前的技术提取副干酪乳杆 菌胞外多糖成本较高， 不适用于工业生产； 三， 副干酪乳杆菌的活性代谢物产量有限， 不可 批量生产。 发明内容 [0005]在下文中给出了关于本公开的简要概述， 以便提供关于本公开的某些方面的基本 理解。 应当理解， 这个概述并不是关于本公开的穷举性概述。 它并不意图确定本公开的关键 或重要部 分， 也不意图限定本公开的范围。 其目的仅仅是以简化的形式给出某些概念， 以此 作为稍后论 述的更详细描述的前序。 [0006]为解决上述 技术问题， 本公开 提供的技 术方案是： [0007]第一方面， 本公开提供副干酪乳杆菌(Lactobacillus  paracasei)菌株SS ‑01， 其 保藏编号 为CGMCC No.23145。 [0008]本公开的副干酪乳杆菌(Lactobacillus  paracasei)菌株SS ‑01从酸奶中分离得 到。 具体地， 取5mL酸奶与45mL无菌生理盐水混合， 体积比为1： 9， 吸取50 μL稀释后的菌液于 MRS固体平板上(蛋白胨10.0g/L， 牛肉粉8.0 g/L， 酵母粉4.0g/L， 葡萄糖20.0 g/L， 磷酸氢二 钾2.0g/L， 柠檬酸氢二铵2.0g/L， 乙酸钠5.0g/L， 硫酸镁0.2g/L， 硫酸锰0.04g/L， 吐温80   1.0g/L， pH值5.7 ±0.2)， 用涂布棒涂匀， 37℃培养48h。 挑选单个的具有典型乳酸菌菌落特 征且形态差异较为明显的菌落， 划线纯化2～3代， 将上述分离纯化得到的乳酸菌接入MRS斜 面培养基， 4℃保藏。 [0009]第二方面， 本公开 提供一种副干酪乳杆菌胞外多糖的制备 方法， 包括： [0010]发酵步骤： 将上述副干酪乳杆菌SS ‑01经活化、 纯化、 扩大培养处理所得种子液接说　明　书 1/13 页 3 CN 114736835 A 3