(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210721964.X (22)申请日 2022.06.24 (83)生物保 藏信息 CCTCC M 2022503 2022.04.27 (71)申请人 自然资源部第三海 洋研究所 地址 361005 福建省厦门市思明区大 学路 178号 (72)发明人 杨献文　马华彬　汪朝凤　邹正彪　 徐琳　谢明敏　郝优佳　 (74)专利代理 机构 广州晟策知识产权代理事务 所(普通合伙) 44709 专利代理师 王静　郑书鑫 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12P 17/08(2006.01)C07D 313/00(2006.01) A61K 31/365(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 1/18(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 21/00(2006.01) C12R 1/77(2006.01) (54)发明名称 镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡 相关疾病中的应用 (57)摘要 本发明公开了镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑ 48、 利用其制备发酵化合物及其发酵化合物在制 备防治坏死样凋亡(necrop tosis)相关疾病中的 应用。 镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑48于2022年4 月27日保藏于中国典型培养物保藏中心， 保藏编 号为CCTCC  M 2022503； 本发明镰刀菌Fusarium   sp.ZEN‑48的发酵产物为大环内酯类化合物或其 盐， 具有靶向性抑制TNFα诱导的坏死样凋亡的 作用， 可用于制备抗坏死样凋亡相关疾病的治疗 药物。 本发明对我国海洋药物开发具有重要意 义， 对坏死样凋亡相关的疾病治疗和新药开发具 有重要意 义。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 115074255 A 2022.09.20 CN 115074255 A 1.镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑48菌株， 保藏编号为CCTCC  M 2022503， 2022年4月27日 保藏于中国典型培 养物保藏中心。 2.镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑48在制备发酵化合物中的应用， 其特征在于， 所述发酵 化合物为大环内酯类化 合物或其盐， 其结构如式(I)所示： 3.如权利要求2所述发酵化 合物的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 将保藏编号为CCTCC  M 2022503的镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑48进行发酵培养， 得 到发酵物； S2、 将步骤S1得到的发酵物用乙酸乙酯进行萃取， 取有机萃取物进行层析， 分别使用石 油醚、 二氯甲烷和甲醇进行洗脱， 浓 缩二氯甲烷层， 得到粗 提物； S3、 将步骤S2得到的粗提物用正相硅胶柱色谱进行分离， 用二氯甲烷 ‑甲醇体系进行梯 度洗脱， 依次得到 3个粗馏分： Fr.1～Fr.3； S4、 将粗馏分Fr.1先使用ODS柱色谱进行分离， 再使用水 ‑甲醇体系进行梯度洗脱依次 得到两段粗馏分： Fr.1 ‑1、 Fr.1‑2； S5、 将粗馏分Fr.1 ‑1用葡聚糖凝胶柱分离后重结晶得到所述发酵化 合物。 4.镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑48的发酵化合物在制备防治坏死样凋亡相关疾病的药 物中的应用， 其特征在于， 所述镰刀菌ZEN ‑48的发酵化合物如权利要求2中所定义 或如权利 要求3所述制备 方法获得。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述坏死样凋亡为TNFα 诱导的坏死样凋亡或 TNFα +ZVAD诱导的坏死样凋亡。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述药物是通过靶向RIPK3破坏坏死小体的 形成和RIPK3 /MLKL的磷酸 化， 进而抑制坏死样凋亡。 7.如权利要求4 ‑6任一项所述的应用， 其特征在于， 所述坏死样凋亡疾病包括神经退行 性疾病、 炎症 性肠病、 动脉粥样硬化、 急性胰腺炎、 急性/药物 诱导的肝损伤、 急性肾损伤、 病 毒性感染及肿瘤中的一种或多种。 8.如权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述神经退行性疾病 包括阿尔茨海默症和肌 萎缩侧索硬化； 和 /或， 所述肿瘤包括脑胶质瘤、 乳腺癌、 肺癌、 肝癌、 食管癌、 结直肠癌和前 列腺癌中的一种或多种。 9.如权利要求4 ‑6、 8中任一项或权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述药物包含药 学有效量的发酵化合物及药物辅料， 所述酵化合物如权利要求2中所定义； 和/或， 所述药物 的剂型为丸剂、 片 剂、 颗粒剂、 胶囊剂、 溶 液剂、 管饲制剂、 混悬剂、 喷雾剂或膏剂。 10.一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物 组合物包含权利要求2所述的发酵化合物， 所述发酵化 合物通过权利要求3所述的制备 方法获得。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074255 A 2镰刀菌及其发酵化合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及微生物、 药物化合物技术领域， 具体涉及 镰刀菌ZEN ‑48、 利用其制备发 酵化合物及其发酵化 合物在防治坏死样凋亡相关疾病中的应用。 背景技术 [0002]坏死样凋亡(Necroptosis)是一种非Caspase依赖的程序性细胞死亡， 被认为与多 种人类疾病有关， 如神经退行性疾病和炎症性疾病及病毒感染引发的相关疾病。 坏死样凋 亡可由死亡受体、 Toll样受体、 干扰素受体等激活诱导。 在坏死样凋亡中， 有一个核心信号 轴， RIPK1(受体相互作用蛋白激酶1) ‑RIPK3(受体相互作用蛋白激酶3) ‑MLKL(混合谱系 激 酶结构域样假激酶)， 并形成由RIPK1 ‑RIPK3‑MLKL组成的坏死小体， 最终诱导MLKL的磷酸化 和寡聚化， 进 而转移到质膜并触发膜溶解， 导 致细胞内容物完全释放并促进炎症。 [0003]大量的研究证实RIPK1是细胞凋亡和坏死以及炎症通路中的一个关键调节因子。 RIPK1逐渐成为神经退行性疾病、 自身免疫性疾病和炎症 等多种疾病治疗的有效靶点之一。 目前， 用于自身免疫性疾病的GSK ′772、 用于肌萎缩侧索硬化症(ALS)的DNL747等， 正在临床 试验中进行研究。 但是， 总的来说， 对程序性坏死的研究以及相关靶点， 包括RIPK1、 RIPK3和 MLKL的研究还处于初期 。 因此， 具有选择性、 有效性和安全性的坏死样凋亡小分子抑制剂有 待于进一 步的被发现和开发。 [0004]大环内酯类是一类以大环内酯环为特征并以可变侧链/基团为特征的疏水化合 物。 大环内酯类药物已被证明具有治疗特性。 事实上， 一些广为人知的抗生素化合物， 包括 红霉素， 是大环内酯类。 除了抗生素特性外， 大环内酯类还显示出其他广泛的药理作用， 如 抗病毒、 抗寄生虫、 抗真菌和免疫抑制作用等。 因此， 开发大环内酯类药物在防治坏死样凋 亡疾病中应用是有必要的。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑48及其发酵化合物在制 备坏死样凋亡药物中的应用。 本发 明提供的大环内酯类化合物 为brefeldin  A或其盐， 分离 自镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑48的发酵产物， 其对TNFα 诱导的坏死样凋亡具有显著的靶向 抑制作用， 对坏死样凋亡相关的疾病治疗和新药开发具有重要意 义。 [0006]本发明的第一方面， 提供保藏编号为CCTCC  M 2022503的镰刀菌(Fusarium  sp.) ZEN‑48， 保藏于中国典型培 养物保藏中心。 [0007]本发明的第二方面， 提供镰刀菌(Fusarium  sp.)ZEN‑48在制备发酵化合物中的应 用， 所述发酵化 合物为大环内酯类化 合物或其盐， 其结构如式(I)所示：说　明　书 1/6 页 3 CN 115074255 A 3