(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210740644.9 (22)申请日 2022.06.27 (71)申请人 上海理工大 学 地址 200093 上海市杨 浦区军工路516号 (72)发明人 管骁　宋洪东　靳祖珑　李森　 张颖　张妤　曹洪伟　 (74)专利代理 机构 上海科盛知识产权代理有限 公司 312 25 专利代理师 褚明伟 (51)Int.Cl. C07K 14/415(2006.01) C12N 15/29(2006.01) C12P 21/06(2006.01) C07K 1/16(2006.01) B82Y 5/00(2011.01)B82Y 40/00(2011.01) A61K 47/42(2017.01) A61K 47/18(2006.01) A61K 31/216(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 31/12(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (54)发明名称 大麦源自组装肽 及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明涉及大麦源自组装肽及其制备方法 和应用。 大麦自组装肽P1为DQVSRLL， 大麦自组装 肽P2为QVIPF， 大麦自组装肽P3为KVFLQ。 本发明 还提供了 大麦自组装肽的制备方法， 以大麦为原 料制备大麦谷蛋白， 然后利用碱性蛋白酶将大麦 谷蛋白酶解得到大麦谷蛋白酶解物， 利用超声法 辅助制备大麦谷蛋白肽纳米颗粒， 进而通过排阻 色谱分离 大麦谷蛋白肽纳米颗粒， 得到具有自组 装能力的大麦自组装肽。 本发明提供的自组肽可 用于疏水性功能因子的包埋， 极大提高疏水功能 因子的水溶性和稳定性。 与现有技术相比， 本发 明提供的自组装肽制备简单， 无化学溶剂残留， 安全性高， 成本低， 具有重要应用前 景。 权利要求书1页 说明书5页 附图4页 CN 115124608 A 2022.09.30 CN 115124608 A 1.大麦源自组装肽， 其特 征在于， 选自以下自组装肽中的一种或几种： 大麦自组装肽P1， 为DQVSRL L， 氨基酸序列为Asp ‑Gln‑Val‑Ser‑Arg‑Leu‑Leu； 大麦自组装肽P2， 为 QVIPF， 氨基酸序列为Gl n‑Val‑Ile‑Pro‑Phe； 大麦自组装肽P3， 为KVFL Q， 氨基酸序列为 Lys‑Val‑Phe‑Leu‑Gln。 2.编码权利要求1所述大麦源自组装肽的多 核苷酸。 3.权利要求1所述大麦源自组装肽的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)大麦谷蛋白的制备； 2)大麦谷蛋白的酶解： 采用碱性蛋白酶Alcalase  2.4L对大麦谷蛋白进行酶解， 得到大麦 谷蛋白肽； 3)大麦谷蛋白肽 纳米颗粒的制备： 将大麦谷蛋白肽分散 于去离子水， 超声， 制备肽 纳米颗粒； 4)大麦谷蛋白自组装肽的分离纯化 采用色谱柱对大麦谷蛋白肽纳米颗粒进行分离， 以去离子水为流动相， 检测洗脱过程 中各个洗脱峰 的粒径， 收集粒径 为20‑200nm的颗粒 组分， 获得大麦谷蛋白自组装肽， 即权利 要求1所述大麦源自组装肽。 4.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 步骤1)中， 大麦谷蛋白的制备方法为： 首先将脱脂大麦粉与1 ‑3％质量分数的NaCl溶液依次混合、 搅拌、 离心得到固体残渣， 将残 渣分散于乙醇溶液中， 水浴提取后离心收集沉淀； 然后将沉淀重新分散在去离子水并调节 pH至10‑12， 进行碱提后离心取上清液； 最后将上清液调pH至4 ‑5.5， 静置沉淀， 水洗， 冷冻干 燥得到大麦 谷蛋白。 5.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 步骤2)中， 大麦谷蛋白的酶解条件为： 酶解环境pH为7 ‑9， 酶解温度3 0‑60℃， 酶与底 物比例为1： 25 ‑100， 酶解时间为0.5 ‑4h。 6.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 步骤3)中， 将大麦谷蛋白肽以0.1 ‑ 5mg/mL的浓度分散 于去离子水中。 7.根据权利 要求3所述的制备方法， 其特征在于， 步骤3)中， 超声的功率为100 ‑500W， 超 声时间5‑25min。 8.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 步骤4)中， 所述色谱柱为葡聚糖凝胶 G‑75玻璃色谱柱。 9.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 步骤4)中， 在214nm处测定吸光度值， 检测洗脱过程中各个洗脱峰的粒径。 10.权利要求1所述大麦源自组装肽 在包埋、 增溶 疏水性功能因子中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115124608 A 2大麦源自组装肽及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明属于多肽自组装技术领域， 尤其是涉及大麦源自组装肽及其制备方法和应 用。 背景技术 [0002]自组装肽(Self ‑assembled  peptides)是可自发形成纳米结构的一类多肽， 在生 物医学、 材料、 化学、 食品等领域具有广泛的应用前景。 自组装多肽源自于自然界中蛋白质 的自组装现象， 通过调节多肽分子的结构以及改变外部环境， 多肽分子可以利用氢键、 疏水 作用、 堆积作用等 非共价键力自发或触发的自组装成形态与结构特异的组装体。 当前， 自组 装肽的一类重要应用是包埋或负载疏水性化合物， 从而提高疏水性功能成分或药物的溶解 性和稳定性。 由多肽自组装构建的纳米载体系统因生物相容性好、 负载能力强等优点而受 到广泛关注。 目前， 人们主要通过人工化学合成方法制备自组装肽进而制备具有不同结构 和功能的纳米颗粒， 用于疏水性活性成分/药物的包埋和负载。 但是， 自组装肽的人工化学 合成存在诸多问题： 1)自组装肽的化学合成用到大量有机有害试剂， 因而合成的自组装肽 存在有害试剂残留， 限制了其在食品等领域的应用； 2)成本高， 一般合成克级的自组装肽， 成本往往在几千 元， 且随肽链长的增加而成本增加； 3)无法大规模制备， 因而限制了肽基自 组装纳米颗粒的实际应用。 因此， 寻找其他方法以大规模制备安全、 低成本的自组装肽就显 得非常必要。 发明内容 [0003]为了解决现有技术中存在的问题， 本发明的目的在于提供大麦源自组装肽及 其制 备方法和应用。 [0004]本发明旨在利用丰富且廉价的大麦蛋白， 通过生物酶水解， 进而分离纯化而获得 自组装肽， 进 而将其应用于疏 水性功能成分的增溶和稳定 。 [0005]本发明的目的可以通过以下技 术方案来实现： [0006]本发明第一方面， 提供 大麦源自组装肽， 选自以下自组装肽中的一种或几种： [0007]大麦自组装肽P1， 为DQVSRL L， 氨基酸序列为Asp ‑Gln‑Val‑Ser‑Arg‑Leu‑Leu； [0008]大麦自组装肽P2， 为 QVIPF， 氨基酸序列为Gl n‑Val‑Ile‑Pro‑Phe； [0009]大麦自组装肽P3， 为KVFL Q， 氨基酸序列为 Lys‑Val‑Phe‑Leu‑Gln。 [0010]优选地， 所述大麦源自组装肽来自于大麦 谷蛋白。 [0011]本发明第二方面， 提供编码所述大麦源自组装肽的多 核苷酸。 [0012]本发明第三方面， 提供一种大麦源自组装肽的制备 方法， 该方法包括以下步骤： [0013]1)大麦谷蛋白的制备： [0014]2)大麦谷蛋白的酶解： [0015]采用碱性蛋白酶Alcalase  2.4L对大麦谷蛋白进行酶解， 得到大麦 谷蛋白肽； [0016]3)大麦谷蛋白肽 纳米颗粒的制备：说　明　书 1/5 页 3 CN 115124608 A 3