(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210743570.4 (22)申请日 2022.06.27 (71)申请人 安徽医科 大学第一附属医院 地址 230022 安徽省合肥市蜀山区绩溪路 218号 (72)发明人 唐玲　徐元宏　曹康莉　许才瑞　 马阿龙　张敏　王慧　 (74)专利代理 机构 北京润平知识产权代理有限 公司 11283 专利代理师 刘依云 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 融合蛋白及其编码基因和重组载体以及它 们的应用 (57)摘要 本发明涉及生物医学领域， 公开了一种融合 蛋白及其编码基因和重组载体以及它们的应用。 本发明提供的融合蛋白能够特异性结合体内的 NK细胞， 并引导其高效杀 灭表达IL13Rα2的癌细 胞， 具有对癌细胞的杀 灭效果突出， 治疗成本低， 副作用风险低等优点。 权利要求书1页 说明书8页 序列表5页 附图4页 CN 115197326 A 2022.10.18 CN 115197326 A 1.一种融合蛋白， 其特 征在于， 所述融合蛋白包 含以下片段： 片段a： 氨基酸序列如SEQ  ID NO:1所示； 以及 片段b： 氨基酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 2.根据权利要求1所述的融合蛋白， 其中， 所述片段a和片段b之间通过人IgG的Fc区段 铰链区的二硫键共价连接； 和/或， 所述融合蛋白还 包括用于纯化的氨基酸标签。 3.编码表达 权利要求1或2中所述融合蛋白的基因。 4.根据权利要求3所述的基因， 其中， 所述基因包括： (A)编码片段a的核苷酸序列， 如SEQ  ID NO:3所示； (B)编码片段b的核苷酸序列， 如SEQ  ID NO:4所示。 5.一种重组载体， 其特 征在于， 所述重组载体中含有权利要求3或4中所述的基因。 6.权利要求1或2所述的融合蛋白、 权利要求3或4所述的基因或权利要求5所述的重组 载体在制备用于治疗和/或预防肿瘤的药物中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用， 其中， 所述肿瘤选自表达白介素13受体α 2的肿瘤。 8.根据权利要求6或7所述的应用， 其中， 所述肿瘤选自恶性神经胶质瘤、 黑色素瘤、 肾 上腺皮质癌、 胰腺癌、 鳞状头 颈细胞癌、 肾细胞癌和胰腺导管腺癌中的至少一种。 9.根据权利要求6所述的应用， 其中， 所述药物中还 含有药学上可接受的载体。 10.一种治疗和/或预防肿瘤的药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物中含有权利 要求1或2所述的融合蛋白、 权利要求3或4所述的基因或权利要求5所述的重组载体； 或者， 所述药物组合物中仅含有权利要求1或2所述的融合蛋白、 权利要求3或4所述的 基因或权利要求5所述的重组载体作为活性组分。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115197326 A 2融合蛋白及其编码基因和重组载体以及 它们的应用 技术领域 [0001]本发明涉及 生物医学领域， 具体涉及一种融合蛋白及其编码基因和重 组载体以及 它们的应用。 背景技术 [0002]近年来， 生物大分子药物在恶性肿瘤治疗领域取得了非常大的突破， 如单克隆抗 体、 双/多靶点抗体或蛋白等药物的开发成为本领域的研究热门之一。 白介素13受体α2 (IL13Rα 2)在人神经胶质瘤、 黑色素瘤等恶性肿瘤组织细胞表 面特异性高表达， 这使 得其成 为一种潜在的肿瘤治疗 靶点。 前期研究表明， I L13变体(E13Y)能够特异性结合 IL13Rα 2。 [0003]2016年新英格兰医学杂志报道了一例利用T细胞荷载靶向肿瘤的受体 的技术， 即 嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(Chimeric  Antigen Receptor T‑Cell Immunotherapy， 简称 CAR‑T)， 采用荷载IL ‑13变体的CAR ‑T细胞治疗胶质母细胞瘤患者后， 肿瘤消退长达7个月的 临床试验。 然而， 由于该方法基于CAR ‑T疗法对患者进行治疗， 从而使其仍然 无法避免CAR ‑T 疗法本身带来的治疗细胞制备周期长、 费用昂贵、 存在剧烈不良反应风险等问题。 [0004]为了避免CAR ‑T疗法的上述缺陷， 研究人员开发了能够引导免疫细胞(例如T细胞 等)高效杀灭癌细胞的双特异性抗体。 据报道， 目前基于T细胞的CD3 ×IL13Rα2双特异性抗 体处于临床前研究， 使得这种双特异性抗体有望成为新的抗肿瘤药物。 然而， 这种基于T细 胞(CD3)的双特异性抗体 虽然解决了CAR ‑T疗法中制备周期长、 成本高以及特异性高(制得 的CAR‑T细胞仅能回输给患者本人使用)等缺陷， 但是仍存在较大的不良反应风险。 例如， 有 临床试验结果显示， 基于T细胞(CD3)的双特异性抗体在施用后， 会在患者体内引发细胞因 子风暴， 即短时间引发大量IL ‑6、 TNF‑α 等促炎性细胞因子产生， 严重的情况甚至会危机生 命。 发明内容 [0005]本发明的目的是为了克服现有技术中基于T细胞的双特异性抗体使用时在患者体 内会引发细胞因子风暴， 从而存在较大 的不良反应风险等问题， 提供一种融合蛋白及其编 码基因和重组载体以及它们的应用。 该融合蛋白能够结合体内的NK细胞， 并引导其高效杀 灭癌细胞(例如表达IL 13Rα 2的癌细胞)。 该融合蛋白一方面能够实现量化生产， 使用时也不 受个体限制， 另一方面引起细胞因子风 暴等不良反应的风险也得以降低或避免。 [0006]为了发挥NK细胞抗癌功能， 同时避免基于T细胞的细胞疗法、 双特异性抗体疗法等 易引起细胞因子风暴等不良反应的问题， 本发明的发明人经过研究发明了基于抗NKG2D抗 体和IL‑13变体(E13Y)的双特异蛋白。 该双特异蛋白(融合蛋白)能够在GMP标准下大量生 产、 以合理的价格供患者使用， 同时， 与现有的基于T细胞的双特异 性抗体相比， 本发 明提供 的双特异蛋白可以有效降低或避免细胞因子风 暴等副作用的风险， 使用更加安全。 [0007]为了实现上述目的， 本发明一方面提供一种融合蛋白， 所述融合蛋白包含以下片 段：说　明　书 1/8 页 3 CN 115197326 A 3