(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210738691.X (22)申请日 2022.06.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114805580 A (43)申请公布日 2022.07.29 (73)专利权人 北京科诺信诚科技有限公司 地址 102206 北京市昌平区回龙观镇 立业 路6号院东侧一 号楼二层 (72)发明人 焦莎莎　王荣娟　毛冠凡　张畅　 王双　张锦超　 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12P 21/02(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/02(2006.01) (56)对比文件 CN 111699196 A,2020.09.2 2 WO 2021158413 A1,2021.08.12 WO 2022079045 A1,202 2.04.21 WO 20210 53199 A1,2021.0 3.25 WO 2016044022 A1,2016.0 3.24 Hui-Ming Chen等.Blocking immunoinhibitory receptor L ILRB2 reprogram s tumoras sociated myel oid cells and promotes antitumor im munity. 《The Journal of Cl inical Investigation》 .2018, 第128卷(第12期), 宇小婷等.免疫抑制性受体L ILRB2对白血病 细胞系增殖和凋亡的影响. 《上海交通大 学报 （医 学版） 》 .2014,第34卷(第7期), 审查员 刘晓晨 (54)发明名称 靶向人LILRB2的纳米抗体及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种抗LILRB2的纳米抗体、 编 码所述纳米抗体的核酸、 包含所述核酸的表达载 体、 包含所述纳米抗体的药物组合物、 以及制备 药物的用途。 权利要求书1页 说明书8页 序列表8页 附图1页 CN 114805580 B 2022.09.06 CN 114805580 B 1.一种抗LILRB2的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体能够 特异性结合LILRB2， 且所 述纳米抗体中的VH H链的互补决定区CDR包 含： SEQ ID NO： 9所示的CDR 1， SEQ ID NO： 10所示的CDR2， 和SEQ  ID NO： 11所示的CDR3 。 2.根据权利要求1所述的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体是人源化的VHH或骆驼 源化的VH H。 3.根据权利 要求1或2所述的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体具有如SEQ  ID NO： 3 所示的氨基酸序列。 4.一种融合 蛋白， 其特征在于， 其包括能够特异性结合LILRB2的功能结构域， 所述功能 结构域由权利要求1 ‑3任一项所述的抗 LILRB2的纳米抗体构成。 5.一种药物组合物， 其特征在于， 其包括权利 要求1‑3任一项所述的抗LILRB2的纳米抗 体、 或权利要求 4所述的融合蛋白， 以及药 学上可接受的辅料。 6.一种分离的核酸分子， 其特征在于， 其编码权利 要求1‑3任一项所述的抗LILRB2纳米 抗体、 或编码权利要求 4所述的融合蛋白。 7.一种表达载体， 其特 征在于， 所述表达载体含有权利要求6所述的核酸分子 。 8.一种重组细胞， 其特 征在于， 所述重组细胞含有权利要求7 所述的表达载体。 9.制备权利要求1 ‑3任一项所述的纳米抗体的方法， 其特征在于， 其包括： 培养权利要 求8所述的重组细胞， 从培 养产物中分离纯化获得 所述纳米抗体。 10.权利要求1 ‑3任一项所述的抗LILRB2纳米抗体、 权利 要求4所述的融合 蛋白、 权利 要 求5所述的组合物、 权利要求6所述的核酸分子、 权利要求7所述的载体、 或权利要求8所述的 重组细胞在制备 药物中的用途， 所述药物用于预防、 治疗和/或改善实体瘤或血 液瘤。 11.根据权利要求10所述的用途， 所述实体瘤为肺癌、 非小细胞肺癌、 胰腺癌、 胰腺导管 癌、 子宫内膜癌、 肝细胞癌、 黑素瘤、 卵巢癌、 乳 腺癌、 结直肠癌、 胶质瘤、 胃癌、 肾癌、 睾丸癌、 食管癌、 宫颈癌、 鳞 茎肺癌、 甲状腺癌、 肝癌、 尿路上癌症或头 颈部癌症。 12.根据权利要求10所述的用途， 所述血液瘤为慢性淋巴细胞白血病、 急性髓性白血 病。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114805580 B 2靶向人LILRB2的纳米抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明属于抗体工程领域， 具体涉及一种用于诊断或治疗肿瘤的治疗性单域抗 体， 特别是 涉及一种抗 LILRB2的纳米抗体、 其 衍生蛋白以及用于制备 药物的用途。 背景技术 [0002]纳米抗体是目前最小的抗体分子， 最初由比利时科学家Hamers在骆驼血液中发 现， 它是工程化抗体产品中备 受关注的一类。 纳米抗体主要优点： 一是体积是普通抗体的1/ 10， 因为体积小， 其在动物组织体内的穿透力强， 如， 可以通过人体的脑组织， 可以达到高密 度的肿瘤内部， 而普通抗体却不能， 这使 得可以通过纳米抗体来治疗某些肿瘤或脑部疾病； 二是抗原特异性好； 三是易于基因改造， 方便人工改造以获得对抗不同病原的抗体； 四是稳 定性高， 如， 纳米抗体在体内不被自然分解的时间比普通抗体长 （意味着药效时间更持久） ， 纳米抗体甚至能从人胃中通过而保持有效性。 [0003]LILRB2， 又称 ILT4， 主要在髓系 细胞上表达， 包括单核细胞、 树突状细胞、 巨噬细胞 和嗜中性粒细胞。 基因学研究显示多种肿瘤微环境中的肿瘤关联巨噬细胞 （TAM） 高表达 LILRB2， 抑制LILRB2 （小鼠的对应蛋白叫Pirb） 降低Treg和MDSC在肿瘤组织的侵入。 动物实 验显示Pirb抗体抑制抑制肿瘤生长， 并与PD ‑1抗体有协同作用。 LILRB2主要在骨髓细胞表 达、 其它组织表达有限， 这令on ‑target、 off ‑tissue毒性比较轻微。 人LILRB 2是髓细胞成熟 过程中重要的稳态表面调节因子， 是一种有前途的、 专门针对髓细胞功能测定的髓免疫检 查点靶点， 具有重要的治疗价 值。 发明内容 [0004]现有技术中的ScFv、 Fab或全IgG类抗LILRB2抗体分子， 结构复杂、 分子较大， 虽然 能将活性分子连接到LILRB2上， 但影响活性分子的功能、 方法复杂、 负载效率也较低； 纳米 抗体分子较小、 易于操作， 但人源化程度低、 亲和力不高， 延长半衰期的性能有待进一步提 高。 [0005]针对上述现有技术的不足， 本发明提供一系列抗LILRB2纳米抗体序列及制备方 案。 [0006]第一方面， 本发明提供一种抗 LILRB2的纳米抗体， 根据本发明的实施例， [0007]所述纳米抗体能够特异性结合LILRB2， 且所述纳米抗体中的VHH链的互补决定区 CDR为选自下组的一种或多种： [0008]（1） SEQ ID NO： 9所示的CD R1， SEQ ID NO： 10所示的CD R2， 和SEQ  ID NO： 11所示的 CDR3； [0009]（2） SEQ ID NO： 12所示的CDR1， SEQ  ID NO： 13所示的CDR2， 和SEQ  ID NO： 14所示的 CDR3； [0010]（3） SEQ ID NO： 15所示的CDR1， SEQ  ID NO： 16所示的CDR2， 和SEQ  ID NO： 17所示的 CDR3；说　明　书 1/8 页 3 CN 114805580 B 3