(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210738566.9 (22)申请日 2022.06.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114796483 A (43)申请公布日 2022.07.29 (73)专利权人 北京大学 地址 100871 北京市海淀区颐和园路5号 专利权人 北京艾赛吉生物医药 科技有限公 司 (72)发明人 邱晓彦　范天睿　何峙峤　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 孙艳敏 (51)Int.Cl. A61K 39/395(2006.01)A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01) C12N 5/0783(2010.01) (56)对比文件 CN 106729705 B,2018.04.0 6 CN 113913385 A,202 2.01.11 CN 114031688 A,2022.02.11 US 201715723 0 A1,2017.0 6.08 Itziar Ibarlucea-Ben itez等.Siglecs-7/ 9 functi on as inhibitory im mune checkpoints in vivo and can be targeted to enhance therapeutic antitumor immunity. 《PNAS》 .2021,第1 18卷 审查员 陈果 (54)发明名称 活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药 物的用途及抗肿瘤药物 (57)摘要 本发明公开了活化T细胞与阻断性抗体联合 制备抗肿瘤药物的用途及抗肿瘤药物， 所述活化 T细胞， 是从患者自身组织或体液中分离的T细 胞， 先进行抗人CD3抗体分选得到CD3+T细胞， 再 经抗人CD3抗体、 抗人CD28抗体和人IL ‑2刺激活 化获得； 所述阻断性抗体是抗SIA ‑IgG抗体、 抗 Siglec‑7抗体、 抗Siglec ‑9抗体、 抗Siglec ‑10抗 体及抗PD ‑1抗体中的任意一种或 几种。 相较于 单 纯活化T细胞或者单纯阻断性抗体， 联合用药具 有更加明显的治疗效果， 说明使用阻断性抗体与 活化T细胞产生了协同增 效作用， 从而起到更好 的抗肿瘤效果。 权利要求书1页 说明书12页 序列表2页 附图9页 CN 114796483 B 2022.11.08 CN 114796483 B 1.活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药物的用途， 所述活化T细胞， 是从患者自 身组织或体液中分离细胞， 先进行抗人CD3抗体分选得到CD3+T细胞， 再经抗人CD3抗体、 抗 人CD28抗体和人IL ‑2刺激活化获得； 所述阻断性抗体是抗人癌细胞产生的唾液酸化IgG 的 抗体、 抗人Siglec ‑7抗体、 抗人Siglec ‑9抗体、 抗人Siglec ‑10抗体及抗人PD ‑1抗体中的任 意一种或几种； 所述药物同时含有活化T细胞与阻断性 抗体； 所述组织 为癌组织， 所述体液为胸水或腹水。 2.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述体液为胸水或腹水时， 活化T细胞的制 备方法如下： 患者胸水或腹水经离心得细胞沉淀， 细胞沉淀经PBS清洗后， 用密度梯度离心法分离获 得初级体液细胞， 初级体液细胞用人淋巴细胞分离液进行离心分离获得体液细胞； 体液细胞用抗人CD3抗体避光孵育， 然后用PBS洗涤一次并重悬于含1% （v/v） FBS的PBS 中， 用流式分选 仪分选出CD3+T细胞； CD3+T细胞培养体系中加入 抗人CD3抗体、 抗人CD28抗体和人IL ‑2刺激诱导培养， 获得活 化T细胞。 3.根据权利要求1或2所述的用途， 其特征在于， 所述分选得到的CD3+T细胞， 是CD3+ 7AAD‑的T细胞。 4.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述抗人癌细胞产生的唾液酸化IgG的抗 体为RP215或抗SIA ‑IgG人源化抗体， 所述抗SIA ‑IgG人源化抗体的重链可变 区的氨基酸序 列如SEQ ID NO.1所示， 轻链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 5.一种抗肿瘤药物， 其特征在于， 包括活化T细胞和阻断性抗体， 所述活化T细胞， 是从 患者自身组织或体液中分离细胞， 先进行抗人CD3抗体分选得到CD3+T细胞， 再经抗人CD3抗 体、 抗人CD28抗体和人IL ‑2刺激活化获得； 所述阻断性抗体是抗人癌细胞产生的唾液酸化 IgG的抗体、 抗Siglec ‑7抗体、 抗Siglec ‑9抗体、 抗Siglec ‑10抗体及抗PD ‑1抗体中的任意一 种或几种； 所述组织 为癌组织， 所述体液为胸水或腹水。 6.根据权利要求5所述的药物， 其特征在于， 所述体液为胸水或腹水时， 活化T细胞的制 备方法如下： 患者胸水或腹水经离心得细胞沉淀， 细胞沉淀经PBS清洗后， 用密度梯度离心法分离获 得初级体液细胞， 初级体液细胞用人淋巴细胞分离液进行离心分离获得体液细胞； 体液细胞用抗人CD3抗体避光孵育， 然后用PBS洗涤一次并重悬于含1% （v/v） FBS的PBS 中， 用流式分选 仪分选出CD3+T细胞； CD3+T细胞中加入抗人CD3抗体、 抗CD28抗体和人I L‑2刺激诱导培养， 获得活化T细胞。 7.根据权利要求5所述的药物， 其特征在于， 所述抗人癌细胞产生的唾液酸化IgG的抗 体为RP215或抗SIA ‑IgG人源化抗体， 所述抗SIA ‑IgG人源化抗体的重链可变 区的氨基酸序 列如SEQ ID NO.1所示， 轻链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO.2所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114796483 B 2活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药物的用途及抗肿 瘤药物 技术领域 [0001]本发明涉及肿瘤免疫治疗技术领域， 具体涉及活化T细胞与阻断性抗体联合制 备 抗肿瘤药物的用途及抗肿瘤药物。 背景技术 [0002]使用T细胞进行肿瘤免疫治疗在临床上已取得突破性进展， 主要治疗思路是通过 基因工程技术， 将T细胞激活， 并装上定位导航装置CAR （肿瘤嵌合抗原受体） ， 成为CAR ‑T细 胞， 这种T细胞利用其 “定位导航装置 ”CAR， 专门识别体内肿瘤细胞， 并通过直接免疫杀伤及 释放大量的多种效应因子， 进而杀灭肿瘤细胞， 达到治疗恶性肿瘤的目的。 但该技术难度 大、 实施成本高， 且目前只对B 细胞白血病有效。 发明内容 [0003]本发明的目的是针对现有技术中的上述问题， 提供一种活化T细胞与阻断性抗体 联合制备抗肿瘤药物的用途及抗肿瘤药物。 [0004]本发明技 术方案详述如下： [0005]第一方面， 本 发明提供了活化T细胞与阻断性抗体联合制备抗肿瘤药物的用途， 所 述活化T细胞， 是从患者自身组织或体液 中分离细胞， 先进行抗人CD3抗体分选得到CD3+T细 胞， 再经抗人CD3抗体、 抗人CD28抗体和人IL ‑2刺激活化获得； 所述阻断性抗体是抗人癌细 胞产生的唾液酸化IgG(SIA ‑IgG， 或SI G)的抗体、 抗人Siglec ‑7抗体、 抗人Siglec ‑9抗体、 抗 人Siglec ‑10抗体及抗人P D‑1抗体中的任意 一种或几种。 [0006]可选或优选的， 上述用途中， 所述组织为癌组织， 所述体液为外周血、 胸水或腹水。 其中由于胸水和腹水相 较于癌组织和外周血量更大、 对患者来说属于废物获取更容易， 因 此是更为适合临床应用的体液 材料。 [0007]可选或优选的， 上述用途中， 所述体液为胸水或腹水时， 活化T细胞的制备方法如 下： [0008]患者胸水或腹水经离心得细胞沉淀， 细胞沉淀经PBS清洗后， 用密度梯度离心法分 离获得初级体液细胞， 初级体液细胞用人淋巴细胞分离液进行离心分离获得体液细胞； [0009]体液细胞用抗人CD3抗体避光孵育， 然后用PBS洗涤一次并重悬于含1% （v/v） FBS的 PBS中， 用流式分选 仪分选出CD3+T细胞； [0010]CD3+T细胞培养体系中加入抗人CD3抗体、 抗人CD28抗体和人IL ‑2刺激诱导培养， 获得活化T细胞。 [0011]其中， 所述的初级体液细胞、 体液细胞仅用于描述目的， 代表经过密度梯度离心后 获得的细胞、 用人淋巴细胞分离液分离后 获得的细胞， 并非具有医学或者生物学特定含义 的词。 PBS 即磷酸盐缓冲液 （Phosphate  Buffered  Saline） ， FBS 即胎牛血清 （Fetal  Bovine  Serum） 。说　明　书 1/12 页 3 CN 114796483 B 3