(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210762742.2 (22)申请日 2022.06.29 (71)申请人 东南大学 地址 210096 江苏省南京市玄武区新 街口 街道四牌楼 2号 (72)发明人 陈宝安　杜颖　沈艳飞　栾建凤　 王淑君　章美琳　 (74)专利代理 机构 北京同辉知识产权代理事务 所(普通合伙) 11357 专利代理师 王艳秋 (51)Int.Cl. A61K 9/52(2006.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 47/02(2006.01) A61K 38/44(2006.01)A61K 31/704(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C01G 3/12(2006.01) (54)发明名称 抗肿瘤药剂、 纳米反应 器、 制备方法及应用 (57)摘要 本发明公开了抗肿瘤药剂、 纳米反应器、 制 备方法及应用， 属于生物医药技术领域， 将生物 素化的GOx通过蛋白质和生物素之间的强亲和力 锚定在血小板膜表面， 形成GOx功能化的血小板 膜， 并以此GOx功能化的血小板膜包封表面涂覆 MnO2纳米壳及内部封装 化疗药物DOX的中空介孔 硫化铜纳米载体。 除了实现对化疗 药物阿霉素的 高效装载和靶向输送。 还具有以下特性： 具有环 境响应能力， 可以消耗葡萄糖与GSH， 生成氧气， 有利于改善肿瘤微环境； Mn O2纳米壳作为化疗药 物DOX的“守门人”， 当其与肿瘤组织中高浓度的 GSH反应时， 可实现DOX的高效精准释放； 实现了 化疗/饥饿治疗/光热治疗三合一的多模态治疗， 获得了良好的抗肿瘤效果。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 115137712 A 2022.10.04 CN 115137712 A 1.一种纳米反应 器， 包括： 纳米载体， 纳米载体内部 封装有药物； 纳米壳包裹纳米载体； 其特征在于， 血小板膜包裹纳米 壳， 血小板膜的表面联接有葡萄 糖氧化酶。 2.根据权利要求1所述的纳米反应 器， 其特征在于， 纳米载体材 料为硫化铜。 3.根据权利要求1所述的纳米反应 器， 其特征在于， 纳米壳表面涂覆有二氧化锰层。 4.根据权利要求1 ‑3任一所述的纳米反应器， 其特征在于， 血小板膜的表面负载有葡萄 糖氧化酶的方法： 在10mg/mL的生物素溶液中， 加入6.4mg  N， N‑碳基二咪唑， 在4℃条件下加入5mL葡萄糖 氧化酶(2mg/mL)溶 液， 4℃条件下反应6 0min， 获得生物素化葡萄糖氧化酶溶 液； 生物素化葡萄糖氧化酶溶液置于透析袋 中， 截留分子量14kDa， 在去离子水环境中透析 24h， 获得透析 纯化后的生物素化葡萄糖氧化酶溶 液； 将透析纯化后的生物素化葡萄糖氧化酶溶液加入制备好的1mL血小板膜溶液中， 在4℃ 环境中， 置 于摇床上在10 0r/min条件下反应2h， 获得 血小板膜的表面负载有葡萄糖氧化酶。 5.根据权利要求1 ‑3任一所述的纳米反应器， 其特征在于， 硫化铜纳米载体的制备方 法： 480mg的聚乙烯 吡咯烷酮(PVP  K30)溶解在50mL纯水中； 200μL的氯化铜溶液(0.5mol/ L)滴加到PKP ‑K30溶液中， 以80 0rpm/分钟(mi nute， min)的速度搅拌5mi n， 获得溶液1； 向溶液1中加入50mLpH＝9的水溶液， 以800rpm/min的速度搅拌5min。 随后加入12.8 μL 的50％水合肼， 以800rpm/min的速度搅拌5mi n， 获得溶液2； 溶液2中加入400mL浓度为320mg/mL的硫化钠溶液； 在60℃的油浴中以800rpm/min的速 度搅拌2h； 反应结束后， 冷却至室温， 通过离心得到沉淀物， 沉淀物并用超纯水洗涤至中性， 干燥 后得到带有中空介孔的硫化铜纳米载体。 6.根据权利要求1 ‑3任一所述的纳米反应器， 其特征在于， 硫化铜纳米载体的内部封装 化疗药物DOX的方法： 10mg干燥后的硫化铜纳米载体， 将其溶解于10mL磷酸缓冲盐溶液(PBS)(0.1mM,pH＝ 7.4)缓冲液中， 后加入1.0mg  DOX， 在室温避光条件下， 以600rpm/min的速度搅拌过 夜， 离心 收集沉淀得到 。 7.根据权利要求1 ‑3任一所述的纳米反应器， 其特征在于， 硫化铜纳米载体表面覆盖有 二氧化锰纳米壳的方法： 10mg HMCuS‑DOX NPs置于25mL去离子水中； 在超声波处理下(60KHz)， 将2mL的KMnO4水 溶液(10mg/mL)逐滴加入H MCuS‑DOX NPs悬浮液中， 反应3 0min； 反应结束后， 收集混合物， 以10,0 00rpm/min速度离心5mi n。 8.根据权利要求1 ‑3任一所述的纳米反应器， 其特征在于， 葡萄糖氧化酶功能化血小板 膜包封二氧化锰纳米壳的方法： 将1mL HMMD NPs(2mg/mL)与从2mL葡萄糖氧化酶功能化的血小板膜混合， 在参数为 60W， 40kHz的超声波中处理5min。 9.一种抗肿瘤药剂， 包括权利要求1 ‑3任一所述的纳米反应 器。 10.一种根据权利要求1 ‑3任一所述的纳米反应 器在抗肿瘤的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115137712 A 2抗肿瘤药剂、 纳米反 应器、 制备方 法及应用 技术领域 [0001]本公开属于生物医药技术领域， 具体涉及抗肿瘤药剂、 纳 米反应器、 制备方法及应 用。 背景技术 [0002]“刺激敏感型纳米载体(Stimulus  sensitive  nanocarrier， 刺激敏感型纳米载 体)”已成为一种新的肿瘤治疗策略， 因为这些刺激敏感型纳米载体在生理系统中保持其隐 身性质， 并且在归巢到目标组织或其环境时被激活/触发以释放有效载荷。 发明内容 [0003]第一方面， 针对现有技术的不足， 本公开的目的在于提供一种纳米反应器， 改善肿 瘤微环境、 药物高效精准释放、 消耗肿瘤组织葡萄糖的联合作用下， 提高抗肿瘤效果。 [0004]本公开的目的可以通过以下技 术方案实现： [0005]一种纳米反应 器， 包括： 纳米载体， 纳米载体内部 封装有药物； [0006]纳米壳包裹纳米载体， 血小板膜包裹纳米壳， 血小板膜的表面负载有葡萄糖氧化 酶。 [0007]在一些公开中， 纳米载体材 料为硫化铜。 [0008]在一些公开中， 纳米壳表面涂覆有二氧化锰层。 [0009]当然在一些案例中， 血小板膜的表面负载有葡萄糖氧化酶， 形成葡萄糖氧化酶功 能化的血小板膜可对PLGA基纳米载体、 二氧化锰纳米壳包被的二氧化硅纳米颗粒、 装载二 氧化锰的纳米载体进 行包裹， 实现饥饿治疗。 此外， 在二氧化锰存在的情况下可产生级联反 应， 改善肿瘤微环境， 最终提高抗肿瘤效果。 [0010]在一些公开中， 血小板膜的表面负载有葡萄糖氧化酶的方法： [0011]10mg生物素溶解在1mL二甲基甲酰胺中， 加入6.4mg  N， N‑碳基二咪唑， 在4℃条件 下加入5mL葡萄糖氧化酶(2mg/mL)溶液， 4℃条件下反应60min， 获得生物素化葡萄糖氧化 酶 溶液； [0012]生物素化葡萄糖氧化酶溶液置于透析袋中， 截留分子量14kDa， 在去离子水环境中 透析24h， 获得透析 纯化后的生物素化葡萄糖氧化酶溶 液； [0013]将透析纯化后的生物素化葡萄糖氧化酶溶液加入制备好的1mL血小板膜溶液中， 在4℃环境中， 置于摇床上在100r/min条件下反应2h， 获得血小板膜的表 面负载有葡萄糖氧 化酶。 [0014]在一些公开中， 硫化铜纳米载体的制备 方法： [0015]480mg的聚乙烯吡咯烷酮(PVP  K30)溶解在50mL纯水中； 200μL的氯化铜溶液 (0.5mol/L)滴加到PKP ‑K30溶液中， 以800rpm/分钟(minute， min)的速度搅拌5min， 获得溶 液1； [0016]向溶液1中加入50mLpH＝9的水溶液， 以800rpm/min的速度搅拌5min。 随后加入说　明　书 1/6 页 3 CN 115137712 A 3