(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210743594.X (22)申请日 2022.06.29 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114805612 A (43)申请公布日 2022.07.29 (73)专利权人 上海优替济生 生物医药有限公司 地址 201318 上海市浦东 新区半夏路10 0弄 4-5号 (72)发明人 赵阳兵　刘晓军　訾振国　 (74)专利代理 机构 上海弼兴律师事务所 31283 专利代理师 黄益澍 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)(56)对比文件 US 2011243932 A1,201 1.10.06 CN 109971717 A,2019.07.0 5 CN 110144326 A,2019.08.20 WO 2021216731 A1,2021.10.28 蔡文治等.CD40 基因特异性 沉默对脑胶质瘤 细胞株U87增殖和迁移的影响. 《苏州大 学学报 （医学版） 》 .2012,第32卷(第1期),第3 6-39和106 页. 肖政.抗GD2抗体疗法用于高危神经母细胞 瘤治疗的研究进 展. 《药学进展》 .2016,第40卷 (第1期),第670 -679页. Bassel Nazha et al..Disialoganglioside GD2 Expres sion in Solid Tumors and Ro le as a Target for Cancer Therapy. 《Fro ntiers i n Oncology》 .2020,第10卷第1-15页. 审查员 唐亚丽 (54)发明名称 一种抗GD2抗体、 含其的CAR、 CAR组合及其应 用 (57)摘要 本发明公开了一种抗GD2抗体、 含其的CAR、 CAR组合及其应用。 一种嵌合抗原受体组合， 其包 含CAR IL13RA2分子、 CAR  GD2分子和如SEQ  ID  NO:13所示的LACO融合蛋白， 所述CAR  IL13RA2分 子包含氨基酸序列如SEQ  ID NO:12所示的scFv   IL13RA2， 所述CAR  GD2分子包含氨基酸序列如 SEQ ID NO:9所示的scFvGD2。 本发明提供 的CAR 组合可增强CAR ‑T细胞对IL13RA2高表达的神经 胶质瘤细胞系的杀伤能力； 且LACO融合蛋白引入 到H08 CAR上后可促进H08  CAR‑T的肿瘤清除能 力， 同时， CAR组合可破坏U87肿瘤细胞的异质性， 避免肿瘤的逃逸。 权利要求书1页 说明书9页 序列表15页 附图13页 CN 114805612 B 2022.10.14 CN 114805612 B 1.一种嵌合抗原受体组合， 其特征在于， 其包含CAR IL13RA2分子、 CAR GD2分子和如SEQ ID  NO: 13所示的LACO融合蛋白， 所述CAR IL13RA2分子包含氨基酸序列如SEQ  ID NO: 12所示的 scFv IL13RA2， 所述CAR GD2分子包含氨基酸序列如SEQ  ID NO: 9所示的scFvGD2。 2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体组合， 其特征在 于， 所述CAR IL13RA2分子从N末端至C 末端依次为： CD8信号肽、 scFv IL13RA2、 CD8铰链区、 CD8穿膜区、 胞 内信号域4 ‑1BB、 CD3ζ 区域； 所述CAR GD2分子从N末端至C末端依次为： CD8信号肽、 scFvGD2、 CD8铰链区、 CD8穿膜区、 胞内 信号域4‑1BB、 CD3ζ 区域。 3.如权利要求1或2所述的嵌合抗原受体组合， 其特征在于， 所述LACO融合蛋白存在于 从N末端至C末端依次为CD8信号肽、 LACO融合蛋白、 CD8铰链区、 CD28穿膜区和CD28胞内区的 结构中。 4.一种分离的核酸， 其特征在于， 其编码如权利要求1~3任一项所述的嵌合抗原受体组 合。 5.一种重组表达载体， 其特 征在于， 其包 含如权利要求 4所述的分离的核酸。 6.如权利要求5所述的重组表达载体， 其特征在于， 所述重组表达载体的骨架为慢病 毒 载体。 7.一种转化体， 其包含如权利要求5或6所述的重组表达载体； 所述转化体的宿主细胞 为真核细胞。 8.一种基因修饰的细胞， 其特征在于， 其在底盘细胞中包含如权利要求1~3任一项所述 的嵌合抗原受体组合， 所述底盘细胞为人T细胞。 9.一种嵌合抗原受体或嵌合抗原受体组合的制备方法， 其包含以下步骤： 培养如权利 要求7所述的转 化体， 从培 养物中获得 所述嵌合 抗原受体或 嵌合抗原受体组合。 10.一种药物组合物， 其特征在于， 其包含如权利要求1~3任一项所述的嵌合抗原受体 组合， 以及药 学上可接受的载体。 11. 如权利要求10所述的药物组合物， 其特征在于， 所述CARIL13RA2分子与所述CAR GD2分 子的质量比为(0.5~3):1， 和/ 或， 所述CARIL13RA2分子与所述LACO 融合蛋白的质量比为(0.5~ 3): 1。 12.一种套装药盒， 其包 含药盒A和药盒B， 其中： 所述药盒A包 含如权利要求1~3任一项所述的嵌合 抗原受体组合； 所述药盒B含有其他抗肿瘤抗体或者包含所述其他抗肿瘤抗体的药物 组合物， 和/或由 激素制剂、 靶向小分子制剂、 蛋白酶体抑制剂、 成像剂、 诊断剂、 化疗剂、 溶瘤药物、 细胞毒性 剂、 细胞因子、 共刺激 分子的激活剂、 抑制性分子的抑制剂以及疫苗组成的群组中的一种或 多种。 13.如权利要求1~3任一项所述的嵌合抗原受体组合、 如权利要求8所述的基因修饰的 细胞或如权利要求10或11所述的药物组合物在制备治疗、 诊断和/或预防肿瘤的药物中的 应用， 所述肿瘤为 IL13RA2阳性和/或GD2阳性肿瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114805612 B 2一种抗GD2抗体、 含其的CAR、 CAR组合及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学、 细胞生物学和免疫肿瘤学领域。 本 发明涉及一种抗GD2抗 体、 含其的嵌合 抗原受体 （CAR） 、 CAR组合及其应用。 背景技术 [0002]恶性神经胶质瘤 （malignant  gliomas， MG） ， 包括多形性成胶质细胞瘤和胶质母细 胞瘤， 在美国每年的新增病例有20000例。 根据美国脑部肿瘤协会的统计， 截至2010年， 美国 有140000人患有恶性的脑部肿 瘤。 尽管MG是一种罕见的疾病， 但是它的恶性程度以及致死 率是非常高的。 现有的标准治疗手段， 效果 非常有限， 外科手术以及放疗后的五年生存率也 非常低。 对于手术后复发的病人， 新的治疗选择也 非常少。 因此， 开 发新的靶点， 新的治疗手 段是广大病人的迫切需求。 由于肿瘤的异质性， 目前本领域面临的主要问题是单一CAR ‑T无 法完全清除病灶内的肿瘤 细胞， 从而产生免疫逃逸。 发明内容 [0003]为了解决上述问题， 本 发明提供一种抗GD2抗体、 含其的CAR、 CAR组合及其应用。 尤 其是本发 明提供 （1） 靶向IL13RA2与CD40转换受体联用mRNA瞬时表达T细胞治疗神经胶质瘤 的应用； （2） 靶向IL13RA2与CD40转换受体联用慢病毒稳定表达T细胞治疗神经胶质瘤的应 用； （3） 靶向IL13RA2与GD2嵌合抗原受体及CD40转换受体联用mRNA瞬时表达T细胞治疗神经 胶质瘤的应用。 本发明提供的CAR组合可增强CAR ‑T细胞对IL13RA2高表达的神经胶质瘤细 胞系的杀伤能力； 且LACO融合蛋 白引入到H08  CAR上后可促进H08  CAR‑T的肿瘤清除能力， 并延长小鼠的生存时长。 同时， CAR组合可破坏U87肿瘤细胞的异质性， 双向靶向U87， 避免肿 瘤的逃逸。 并且， 当LACO融合加入至CAR组合中， 这种杀伤作用更加明显， 说明LACO融合蛋白 同样可以增强T细胞的杀伤功能。 LACO融合蛋白及GD2  CAR均能提高IL13RA2  CAR‑T对标志 物的激活水平以及增强细胞因子的分泌。 [0004]本发明一方面提供一种 抗GD2抗体， 其包含VLGD2和VHGD2， 所述VLGD2包含序列如SEQ   ID NO: 1所示的CDR1、 序列如SEQ  ID NO: 2所示的CDR2和序列如SEQ  ID NO: 3所示的 CDR3； 所述VH GD2包含序列如SEQ  ID NO: 4所示的CDR1、 序列如SEQ  ID NO: 5所示的CDR2和 序列如SEQ  ID NO: 6所示的CDR3 。 [0005]在某些较佳实施方案中， 所述VLGD2包含如SEQ  ID NO: 7所示的氨基酸序列， 且所 述VHGD2包含如SEQ ID NO: 8所示的氨基酸序列。 [0006]在某些较佳实施方案中， 所述抗GD2抗体以scFv形式存在， 例如所述scFv的氨基酸 序列如SEQ  ID NO: 9所示， 核苷酸序列如SEQ  ID NO: 26所示。 [0007]本发明另一方面提供一种嵌合抗