(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210772285.5 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 宁夏医科大学 地址 750000 宁夏回族自治区银川市 兴庆 区胜利街1 160号 (72)发明人 苏春霞　段相国　薛晓楠　闫亚娟　 马斌　陈建　 (74)专利代理 机构 宁夏君创未来专利代理事务 所(普通合伙) 64107 专利代理师 周晓梅 (51)Int.Cl. A61K 9/127(2006.01) A61K 31/715(2006.01) A61K 48/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 35/04(2006.01) C12N 15/66(2006.01) (54)发明名称 一种抗肿瘤靶向药物递送系统及其制备方 法和应用 (57)摘要 一种抗肿瘤靶向药物递送系统包括枸杞多 糖、 肿瘤抗原 CD155质粒、 脂质体， 枸 杞多糖、 肿瘤 抗原CD155质粒包裹在脂质体内。 靶向药物递送 系统的制备方法包括以下步骤： 步骤S001： 构建 pcDNA3.1+‑CD155重组载体； 步骤S002： 制备肿瘤 抗原CD155质粒； 步骤S003： 制备脂质体； 步骤 S004： 用脂质体包覆枸杞多糖和肿瘤抗原CD155 质粒， 形成脂质体纳米粒， 即靶向药物递送系统。 本发明的靶向药物递送系统应用于抗肿瘤药物。 本发明的靶向药物递送系统具有靶向性、 缓释 性、 降低药物毒性以及提高药物稳定性的效果。 权利要求书2页 说明书7页 附图1页 CN 115120560 A 2022.09.30 CN 115120560 A 1.一种抗肿瘤靶向药物递送系统， 其特征在于： 包括枸杞多糖、 肿瘤抗原CD155质粒、 脂 质体， 枸杞多糖、 肿瘤抗原CD15 5质粒包裹在脂质体内。 2.如权利要求1所述的一种抗肿瘤靶向药物递送系统， 其特征在于： 所述包裹在脂质体 内的枸杞多糖、 肿瘤抗原CD15 5质粒的比例为5 00:1。 3.抗肿瘤靶向药物递送系统的制备 方法， 其特 征在于包括以下步骤： 步骤S001： 构建pcDNA3.1+‑CD155重组载体； 步骤S002： 制备肿瘤抗原CD15 5质粒； 步骤S003： 制备脂质体； 步骤S004： 用脂质体包覆枸杞多糖和肿瘤抗原CD155质粒， 形成脂质体纳米粒， 即抗肿 瘤靶向药物递送系统。 4.如权利要求3所述的抗肿瘤靶向药物递送系统的制备方法， 其特征在于： 所述 pcDNA3.1+‑CD155重组载体的构建包括以下步骤： 步骤S101， 设计CD15 5基因的PCR扩增引物并人工合成得到 CD155基因的PCR扩增引物； 步骤S102， 获取总RNA， 并进行逆转录， 得到与CD155基因的编码区序列 的互补DNA， 即 cDNA； 步骤S103， 将PCR扩增引物和cDNA混合进行PCR扩增， 得到含有CD155基因的PCR扩增产 物； 步骤S104， 将pcDNA3.1+载体和PCR扩增产物进行双酶切， 得到pcDNA3.1+双酶切产物和 PCR双酶切产物； 步骤S105， 将pcDNA3.1+双酶切产物和PCR双酶切产物进行连接重组， 得到pcDNA3.1+‑ CD155重组载体。 5.如权利要求4所述的抗肿瘤靶向药物递送系统的制备方法， 其特征在于： 步骤101中， 上游引物为cgGCTAGCATGGCCCGAGCCATGG， 下游引物为ccAAGCTTTCA CCTTGTGCCCTCTGTCTG， 上 游引物含有酶切位 点Nhe I， 下游引物含有酶切位 点Hind III。 6.如权利要求4所述的抗肿瘤靶向药物递送系统的制备方法， 其特征在于： 步骤S102 中， 总RNA的获取 过程为： a. 培养HT‑29细胞， 当HT ‑29细胞长至80%～90%时， 收集HT ‑29细胞， 置于1.5  mL  RNase‑free离心管中， 每管加1mL裂解液， 室温放置 5 min； b. 在RNase‑free离心管中加入200  μL的氯仿， 混匀后在涡旋仪器上进行涡旋15  s ， 之后在室温下静置 3 min； c.将RNase ‑free离心管在12000  rpm的转速下离心10  min， 之后将水相转移到第二个 RNase‑free离心管中； d. 在第二个RNase ‑free离心管中加入0.5倍体积的无水乙醇， 之后将RNase ‑free离心 管中的物质转入到吸附柱中， 之后在4℃的温度下， 将吸附柱120 00 rpm离心3 0 s； e. 在吸附柱加入500  μL RD， 在12000  rpm的转速下离心30  s， 之后将吸附柱内的液体 去掉； f. 加入500 μLRW到吸附柱中， 室温静置2  min， 12000  rpm离心30  s， 之后将吸 附柱内 的液体去掉； g. 将吸附柱转移至第三个RNase ‑free离心管中， 在4℃的温度下， 12000  rpm离心2  权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115120560 A 2min； h. 将吸附柱转移至第四个RNase ‑free离心管 中， 加入30  μL RNase‑free水， 室温静置 2 min， 12000 rpm离心2 min， 收集总RNA。 7.如权利要求4所述的抗肿瘤靶向药物递送系统的制备方法， 其特征在于： 步骤S102 中， 逆转录的过程 为： 将总RNA和通用引物充分混匀， 在PCR仪中65℃孵育5  min， 混匀并离心加入反应缓冲 液、 核糖核酸酶抑制剂、 逆转录酶、 三磷酸脱氧核苷酸混合溶液， 再置于PCR仪进行逆转录， 得到cDNA。 8.如权利要求4所述的抗肿瘤靶向药物递送系统的制备方法， 其特征在于： 步骤S103的 具体过程 为： 将2×TransTaqHiFi  PCR SuperMixI( ‑dye)、 cDNA、 上游引物、 下游引物、 RNase ‑free水 混合在一 起， 在PCR仪内经 过 预变性： 94  ℃ ， 4 min； 变性： 94 ℃， 30s； 退火： 56 ℃,30s； 延伸： 72 ℃， 1min； 如此经历30个循环； 之后总延伸： 72  ℃， 5min， 得到含有CD155基因的PCR扩增产物， 之后通过琼脂糖凝胶对 PCR扩增产物进行 纯化。 9.如权利要求3所述的抗肿瘤靶向药物递送系统 的制备方法， 其特征在于： 用脂质体包 覆枸杞多糖和肿瘤抗原CD15 5质粒的步骤为： 步骤S401， 将枸杞多糖和CD155质粒溶于PBS缓冲液中作为水相， 在40摄氏度的温度下 进行水浴， 并通过旋蒸减压蒸发以将水相中的有机溶剂除去； 步骤S402， 当水相物质旋蒸呈胶状物时加入6mLPBS缓冲液， 继续旋蒸1h直至完全除去 有机溶剂， 得到包覆枸杞多糖和肿瘤抗原CD15 5质粒的脂质体悬 液； 步骤S403， 将脂质体悬 液通过0.2 2 μm的滤菌器除菌， 得到 脂质体纳米粒。 10.一种抗肿瘤靶向药物递送系统在抗肿瘤药物中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115120560 A 3