(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210769797.6 (22)申请日 2022.07.01 (71)申请人 广州迈凯安 生物医药研究院有限公 司 地址 510670 广东省广州市黄埔区 （广州高 新技术产业开 发区） 南翔二路1号自编 一栋301之B03室 (72)发明人 李振　余博函　江文敏　柳莹　 (74)专利代理 机构 广州科沃园专利代理有限公 司 44416 专利代理师 陆丰艳 (51)Int.Cl. A61K 9/127(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61K 47/18(2006.01)A61K 47/24(2006.01) A61K 31/713(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种PEG化带正电荷的脂质体及其制备方法 (57)摘要 本发明属于医药技术领域， 具体涉及一种 PEG化带正电荷的脂质体及其制备方法。 本发明 提供的PEG化带正电荷的脂质体， 包括压缩核酸 药物的髓鞘碱性蛋白复合物， 包裹所述压缩核酸 药物的髓鞘碱性蛋白复合物表面的带正电荷脂 质体， 以及修饰在所述带正电荷脂质体表面的聚 乙二醇； 所述带正电荷脂质体为DOTAP/DHA ‑ DOPC/CTBBA脂质体。 本发明制备的PEG化带正电 荷的脂质体在具有相对小的粒径和电位的同时， 具有良好的包封率， 且毒性低； 运用较少的脂质 体可以包 载较多的核酸药物， 能很好地对核酸药 物进行包载， 并在30d内有很高的稳定性。 而且本 发明制备的PEG化带正电荷的脂质体具有较好的 抑制B16‑F1细胞迁移的能力。 权利要求书1页 说明书9页 附图2页 CN 115006351 A 2022.09.06 CN 115006351 A 1.一种PEG化带正电荷的脂质体， 其特征在于， 包括压缩核酸药物的髓鞘碱性蛋白复合 物， 包裹所述压缩核酸药物的髓鞘碱性蛋白复合物表面的带正电荷脂质体， 以及修饰在所 述带正电荷脂质体表面的聚乙二醇； 所述带正电荷脂质体为DOTAP/DHA ‑DOPC/CTBBA脂质 体。 2.如权利要求1所述的PEG化带正电荷的脂质体， 其特征在于， 所述DOTAP为(2,3 ‑二油 酰基‑丙基)‑三甲基铵 ‑氯盐。 3.如权利要求1所述的PEG化带正电荷的脂质体， 其特征在于， 所述DHA ‑DOPC为中性脂 质， 为二十二碳六烯酸与二油酰磷脂酰胆碱的复合物。 4.如权利 要求1所述的PEG化带正电荷的脂质体， 其特征在于， 所述PEG化带正电荷的脂 质体的粒径为1 10‑130nm。 5.如权利要求1所述的PEG化带正电荷的脂质体， 其特征在于， 所述聚乙二醇为二硬脂 酰基磷脂酰乙醇胺 ‑聚乙二醇20 00。 6.如权利要求1 ‑5任一项所述的PEG化带正电荷的脂质体的制备方法， 其特征在于， 包 括以下步骤： (1)将DOTAP、 DHA ‑DOPC、 CTBBA分别溶解于有机溶剂中， 得DOTAP溶液、 DHA ‑DOPC溶液、 CTBBA溶液， 将聚乙二醇溶解于DEPC处 理水中， 得聚乙二醇溶 液； (2)采用薄膜水化法制备DOTAP/DHA ‑DOPC/CTBBA脂质体； (3)将核酸药物与髓鞘碱性蛋白混合制成压缩核酸药物的髓鞘碱性蛋白复合物； (4)将DOTAP/DHA ‑DOPC/CTBBA脂质体与压缩核酸药物的髓鞘碱性蛋白复合物混合， 得 压缩核酸药物的髓鞘碱性蛋白的带正电荷脂质体； (5)将聚乙二醇溶液加入到压缩核酸药物 的髓鞘碱性蛋白的带正电荷脂质体中， 混合 物置于40‑50℃， 1‑2min， 再置于20‑30℃， 8‑15min， 即得。 7.如权利要求6所述的PEG化带正电荷的脂质体的制备方法， 其特征在于， 所述DOTAP/ DHA‑DOPC/CTBBA脂质体的制备 方法为： (a)将DOTAP溶 液、 DHA‑DOPC溶液、 CTBBA溶液加入容器中， 加入氯仿， 混合， 得混合液； (b)将步骤(a)得到的混合液在真空条件下， 旋转蒸发仪上100rpm、 40 ‑60℃水浴条件下 旋转蒸发40 ‑50min， 在瓶壁形成均一脂质薄膜， 瓶中剩余浓 缩液； (c)将瓶降温至5℃， 并保温结晶7 ‑9h， 过滤得到湿 晶体， 湿晶体在60 ‑70℃下干燥至干 燥失重≤1％， 得到粗品； (d)将步骤(c)所得粗品进行水化处理， 待充分水化后， 超声20 ‑30min， 通过100nm聚碳 酸酯膜挤出， 重复挤出20次， 即得。 8.如权利 要求7所述的PEG化带正电荷的脂质体的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(a) 中所述DOTAP溶 液、 DHA‑DOPC溶液和CTBBA溶液的体积比为9 ‑10:2.5‑3.5:12‑14。 9.如权利 要求6所述的PEG化带正电荷的脂质体的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(5) 中聚乙二醇溶液的加入量为压缩核酸药物的髓鞘碱性蛋白的带正电荷脂质体体积的4 ‑ 6％。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115006351 A 2一种PEG化带正电荷的脂质体及其制备方 法 技术领域 [0001]本发明属于医药技 术领域， 具体涉及一种PEG化带正电荷的脂质体及其制备 方法。 背景技术 [0002]脂质体递送系统是目前研究最广泛的药物递送系统之一。 脂质体是由磷脂和胆固 醇组成的脂质双分子层所构成的封闭囊泡。 由于脂质体内核是水相的特殊结构， 可以用来 包载亲水性的药物， 如DNA、 蛋白质及核酸药物等。 良好的脂质体作为药物 递送载体， 不仅能 够包裹一系列 理化性质不同的抗原及 免疫佐剂， 保护蛋白质多肽抗原不被降解， 还可以促 进抗原递呈细胞对抗 抗原的吞噬及呈递， 提高机体的特异性免疫反应。 [0003]脂质体递送系统作为一类新型的药物递送系统， 被广泛应用于抗肿瘤药物， 如 Sequus公司的Doxil， Elan公司的Myocet； 抗真菌药物， 如Jaxx公司的Vyxeos； 以及应用在 RNAi领域的Onpattr o。 将目的药物从细胞外运输到靶点并表达， 需要经过一系 列阻碍。 细胞 内吞是脂质体药物进入细胞的主要机制， 为了达到有效的递送效率， 脂质体作为药物的递 送系统， 需要克服阻碍。 脂质体作为药物递送系统受关注和益处是能有效地包裹各种 水溶 性的、 离解常数不同的大小分子。 控制剂量达到在 满足疗效的条件下减小给药剂量， 降低副 作用。 通过修饰脂质体的表面和改进功能提高脂质体的靶向性， 控制循环时间和作用部位。 脂质体作为药物递送系统发展至今已经可 以装载化疗药物、 抗微生物及病毒(SARS、 HIV、 AIV、 RV等)药物、 抗寄生虫药物、 基因物质、 疫苗、 治疗蛋白质、 抗炎症药物、 激素和天然药物 等。 载药脂质体具有被动靶向性和主动靶向性(表面修饰的脂质体)、 缓释性， 药物经脂质体 包覆保护药物、 提高药物的稳定性、 减少敏感组织对毒性大药物的暴露， 降低药物毒性。 阳 离子脂质体作为脂质体递送系统中的一类， 通过阳离子脂质体表面携带正电荷， 通过静电 相互作用吸附到带负电荷的细胞表面， 经过细胞内吞作用进入细胞， 形成内涵体； 阳离子脂 质体中的阳离子脂质与内涵体中带负电荷的脂质发生静电相互作用， 带负电荷的脂质由内 涵体的腔外翻转到腔 内， 形成中性离子对， 药物从脂质体中脱离， 进入细胞质， 最后发挥相 应的功能。 [0004]中国专利申请201910847775.5公开了一种脂质体、 其制备方法、 脂质体组装体及 载物脂质体复合体， 该发明提供的脂质体具有长循环、 刺激响应性、 靶向性等性能， 以及具 有多重可修饰位点， 可用于制备功能多样的生物制剂， 为疾病的诊断治疗提供更多方便的 选择。 但是， 其未考虑脂质体的包封率以及稳定性的问题。 [0005]脂质体的研究已经从早期的， 普通的普通脂质体向多功能脂质体的方向发展， 并 且已经在许多方面显示出其潜在的应用价值。 但是， 由于脂质体理想配方、 稳定性等方面的 困难， 目前上市的脂质体制剂的数量有限。 目前现有的脂质体普遍存在包封率低和稳定性 不高的问题。 因此， 研发出一种不仅具有良好的包封率， 而且 具有很高的稳定性的脂质体迫 在眉睫。说　明　书 1/9 页 3 CN 115006351 A 3