ICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3063—2016 马铃薯抗晚疫病室内鉴定技术规程 Code of practice for evaluation of potato resistance to late blight in greenhouse 行业标准信息服务平台 2016-12-23发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T3063—2016 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则编写。 本标准由农业部种子管理局提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。 本标准主要起草人：杨宇红、谢丙炎、冯兰香、振川、凌键、陈国华。 行业标准信息服务平台 I NY/T3063—2016 马铃薯抗晚疫病室内鉴定技术规程 1范围 本标准规定了马铃薯抗晚疫病（lateblight）离体叶片和盆栽鉴定方法与评价标准。 本标准适用于马铃薯（Solanumtubero sumL品种和材料对晚疫病抗性的室内鉴定及评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文 2. 1 RD 马铃薯晚疫病 叶 由致病疫霉 Phs 、叶柄、茎和块茎引起的一 种流行性卵菌病害 病害诊断 参见附 3试剂与材料 3.115% 甲亚砜（DMSO）溶液 在85 灰菌水 加人15m 甲亚矾·混匀后财存于4冰箱中 mL 3.2抗生 素母液R 称取 氨节 素、0.2g利福平、1. g制霉菌素分别溶于少量水中 利福平需先溶于少 量二甲亚中 搅拌至 滤器过滤后，贮存于 4℃冰箱中 备月 3.3培养基 3.3.1 黑麦培养基) 黑麦粒60g 燕 指粉 000mL 6h，用捣碎机捣碎 后经3~4层 包水和滤液加水定容至1000mL.加人蔗糖 布 加热并搅拌至琼脂完全 溶化后，于（121 min 3.3.2选择性黑麦培养基 当100mL灭菌黑麦培养基冷 冲抗生素母液 mL。 使培养基中氨青霉 素、利福平和制霉菌素的终浓度分别为2 g/ml mL。 3.3.3黑麦粒培养基 注意灭菌时不要将管盖完全拧紧，灭菌后再拧紧管盖备用。 3.4对照材料 以马铃薯底西瑞（Desiree）或费乌瑞它（Favurit）等感病品种为感病对照。 3.5育苗基质 将草炭、蛭石和菜田土按体积2：1：1混合均匀，于（134土1)℃湿热灭菌1h。或直接购买商品化 蔬菜育苗基质。 3.6其他用品 培养血、托盘、离心管、烧杯、量筒、锥形瓶、纱布、滤纸、酒精灯、细菌过滤器、小型手持喷雾器、育苗 钵等。 1 NY/T3063-—-2016 4仪器设备和设施 4.1显微镜 放大倍率：40倍~1000倍。 4.2恒温培养箱 温度范围：0℃~50℃，温度波动不大于1℃。 4.3高压灭菌锅 灭菌温度范围：104℃~135℃，灭菌时间范围：4min~120min，最高工作压力：0.25MPa~0.22 MPa 4.4移液器 量程体积：2μL~20μL，系统误差：土1.2%，随机误差：±0.6%。 4.5电子天平 称量范围：0g~1000g，分度值：0.01g。 4.6捣碎机 额定转速：10000r/min~12000r/min，处理量：500mL，工作方法：断续。 4.7超净工作台 洁净等级：100级@≥0.5μm，菌落数：≤0.5个/（皿：h）（90mm培养平皿），平均风速： 0.25m/s~0.6m/s。 4.8人工接种鉴定室 具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。 5鉴定方法 5.1离体叶片法 5.1.1材料育苗 将供鉴定材料及感病对照的种薯置于15℃～20℃下催芽。待薯芽长1cm～1.5cm时，将种薯切成 每块只带1个健康芽眼的薯块，芽眼朝下播于装有育苗基质的育苗钵内，每钵播种1块，置于日光温室 里，温度保持在18℃～25℃，常规水肥管理，自然光照。待幼苗长到7片～10片复叶时，选择生长一致、 标准信息 健壮的幼苗用于抗病性鉴定 5.1.2接种体制备 见附录B。 5.1.3接种 从植株顶部计起，取第3、4、5片展开叶，背面朝上置于双层湿润灭菌滤纸上，在每个小叶叶背主叶 脉的一侧用微量移液器滴加10uL浓度为8×103个孢子囊/mL的孢子囊悬浮液。每份材料设3个重 复，每重复不少于6片复叶。 5.1.4接种后管理 接种后将容器用保鲜膜封好，置于18℃～20℃光照培养箱内，在每日光照16h，黑暗8h，相对湿度 100%条件下培养。 5.1.5病情调查 5.1.5.1调查方法 接种后5d～6d，以复叶的每片小叶为调查单位.测定病斑面积及观察有无孢子囊和霉层，根据表1 中的病害症状描述，逐份材料进行调查，记载接种叶片病情级别。 2 NY/T3063—2016 5.1.5.2病情级别划分 马铃薯抗晚疫病离体叶片法鉴定的病情级别划分见表1。 表1马铃薯抗晚疫病离体叶片法鉴定的病情级别划分 病情级别 症状描述 0 接种叶叶片上无症状 I 仅在叶片上出现针尖大小的枯死斑 2 病斑直径小于0.5cm，周围无褪绿晕圈 3 病斑直径0.5cm~1.0cm，病斑水浸状且周围有退绿晕圈，病斑表面可见到白色菌丝体 4 病斑继续扩大，占叶片总面积的1/2，病斑周围有明显的褪绿圈，并有明显的白色霉层 5 病斑占叶片面积的2/3以上，病斑表面有大量的白色霉状物，并出现组织坏死 5.1.5.3病情指数计算 病情指数（DI)按式(1)计算。 E(sXn) DI = X100 (1) NXS 式中： DI 病情指数； 各病情级别数值； n 各病情级别的病叶（株）数； N 调查的总叶（株）数； S 病情级别的最高数值。 5.1.6鉴定材料处理 鉴定完毕后，将马铃薯发病植株、残体集中进行无害化处理，用于鉴定的育苗基质采用高温灭菌。 5.2盆栽喷雾法 5.2.1材料育苗 同5.1.1。 5.2.2接种 采用喷雾接种法。将在温室内生长15个月～2个月的幼苗移到人工接种鉴定室进行喷雾接种， 以叶片布满菌液但无滴落为度。接种液浓度为8×103个孢子囊/mL。鉴定材料随机或顺序排列，每份 鉴定材料设3个重复，每一重复不少于10株苗。 5.2.3接种后管理 接种后在100%相对湿度下保湿2d后，将相对湿度降为70%左右。接种期间温度保持在15℃~ 20℃范围内，每天光照16h，待4d~5d发病后继续盖膜保持100%的相对湿度，24h后进行调查。 5.2.4病情调查 5.2.4.1调查方法 接种后6d～7d调查病情。以植株为单位调查每份鉴定材料接种后植株的发病情况，根据表2病 害症状描述，逐份材料记载接种植株病情级别.按式（1)计算病情指数（DI）。 5.2.4.2病情级别划分 接种植株病情分级及其对应的症状描述见表2。 3 NY/T3063-—2016 表2 马铃薯抗晚疫病盆栽喷雾法鉴定的病情级别划分 病情级别 症状描述 0 全株叶片无病斑 1 1/5以下叶片上有个别病斑，茎秆无病斑 3 病叶占全株总叶片数的1/4以下，或植株上部茎秆有个别小病斑 5 病叶占全株总叶片数的1/4~1/2.或植株上部茎秆有扩展型病斑 7 病叶占全株总叶片数的1/2以上，或植株中下部茎秆上有较大病斑 9 全株叶片几乎都有病斑，或大部分叶片枯死，甚至茎部枯死 5.2.5 鉴定材料处理 同5.1.6。 P 6 抗病性评价 6.1 离体叶片法抗病性评价 6. 1.1 评价标准 抗性划分标准 见表 马铃薯抗晚疫病离体叶片法鉴定的评价标 DD 高折 抗病 <60 中感 感病 高感 S 6.1.2鉴定有效性 判别 当感病对照材 达 DD 60.该批次 抗晚疫 餐定结果 6.1.3抗性判断 依据鉴定材料 重复 并附原始记录 （参见附录C)。 6.2盆栽喷雾法抗病性 6.2.1评价标准 抗性划分标准见表4 马铃薯抗晚疫病盆栽喷 表4 定的评价 标 病害指数(DI) 抗性评价 DII 高抗（HR） <D10 抗病（R 10<DI≤20 中抗（MR） 20<DI≤30 中感（MS） 30<DI≤40 感病(S) DI>40 高感(HS) 6.2.2鉴定有效性判别 当感病对照的植株达到其相应感病程度（DI>30），该批次鉴定结果视为有效。 6.2.3抗性判断 同6.1.3。 4 NY/T3063—2016 附录A （资料性附录） 马铃薯晚疫病 A.1症状描述 主要受害部位为叶片、叶柄、茎和块茎，多从植株下 部叶片开始 叶片染病在叶尖或叶缘出现水渍 状、绿褐色斑点，病斑同围具浅绿色是圈，湿度大B斑速扩 为褐色 并在其周围产生一圈白霉，尤 之后，病斑上也可产生白色霉层，多 雨条件下整个植株腐败 上形成 陷的病斑，病斑组织为浅褐色至 大小不等 深褐色的坏死 病薯 RESE A.2 病原菌 A.2.1学名 致病疫霉 Phy hthora inJestansMont. DdeBary 属于卵菌纲 etes 霜霉目（Peronos- ARO porales) 腐霉 ceae)疫赛属（Phtophthora） A.2.2 晚疫病 麦琼脂培养基或黑 番茄汁培养基上生长.菌落白 有丝无色、无隔、自由分 枝。孢囊梗由百 菌丝生 出：直立、合轴分枝：顶端） 膨大形成 生长，将孢子囊推 向一侧，顶端 再次膨 形成新的孢子囊·使整 一泡囊 的结节状 孢囊梗顶 端尖细，孢子囊顶 生或侧生 色单 卵圆形或近圆形·大小为（2 锁端有 无 半乳突，基部具短 23 在 柄，较易脱 落 动抱 游动孢子 中游动片刻后静止， 鞭毛收缩成 图 A 9.1)μm×（23.5~ 47.2)μm。 橘红 54.1μm 29 2）μm，藏卵器穿过 球开 3 雄器，雄器半球 A.2.3