ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3065—2016 西瓜抗南方根结线虫室内鉴定技术规程 Technical code for evaluation on watermelon resistance against southern root-knotnematode in greenhouse 行业标准信息服务平台 2016-12-23发布 2017-04-01实施 中华人民共和国农业部 发布 NY/T3065—2016 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。 本标准由农业部种子管理局提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。 本标准主要起草人：苑振川、杨宇红、谢丙炎、凌键、陈国华 行业标准信息服务平台 I NY/T3065—2016 西瓜抗南方根结线虫室内鉴定技术规程 1范围 本标准规定了西瓜抗南方根结线虫的室内抗性鉴定方法及抗性评价方法。 本标准适用于西瓜（Citrulluslanatus）品种及材料对南方根结线虫（Meloidogyneincognita）的室 内抗性鉴定及评价。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 南方根结线虫Meloidogyneincognita 属于垫刃目异皮线虫科根结线虫属南方根结线虫种，二龄幼虫呈蠕虫形，雌成虫呈梨形体，雄虫呈 线性，卵呈长椭圆形，为植物体内专性寄生线虫。侵染西瓜根系引起根系肿大畸形，形成大小不等瘤状 根结，地上部植株矮小黄化，开花迟、结瓜小、易早衰（参见A.1）。 2.2 南方根结线虫生理小种Meloidogyneincognitarace 是指南方根结线虫种内在形态上无差别，但在植物的不同品种上具有显著致病性差异的群体，共包 含4个生理小种，分别为生理小种1、生理小种2、生理小种3、生理小种4.需要采用一套鉴别寄主植物 进行区分（参见A.2）。 2.3 南方根结线虫鉴别寄主Meloidogyneincognitadifferentialhost 用于鉴定和区分南方根结线虫4个生理小种的一套植物材料，包括烟草、棉花、辣椒、西瓜、花生、番 茄6种植物（参见A.2）。 3抗性鉴定方法 3.1试剂、材料及仪器设备 3.1.1试剂 浓度0.5%次氯酸钠溶液。将10mL5.0%的次氯酸钠溶液（游离碱含量）加入在90mL灭菌水中， 混合均匀。 3.1.2基质 将草炭、蛭石和细沙按体积2：1：1混合均匀，于（121土1)℃湿热灭菌30min，或是直接购买商品 化基质。 3.1.3仪器设备 显微镜：放大倍率4X100×。 高压灭菌锅：温度范围104℃~135℃，时间范围：4min~120min，工作压力范围：0.22MPa~0.25 MPa。 筛网：规格为100目～200目的筛网。 3.2室内抗性鉴定 3.2.1西瓜育苗 1 NY/T3065—2016 西瓜种子用0.5%次氯酸钠消毒10min，用灭菌水冲洗干净，去掉次氯酸钠残留。在25℃~28℃下 避光催芽，当种子露白时播种于育苗钵（9cm×9cm×12cm），每钵一株，每钵约150g基质。在温度 25℃～28℃、湿度70%～80%条件下进行育苗，当西瓜幼苗长到2片真叶期时用于接种鉴定。 3.2.2南方根结线虫接种体制备 将南方根结线虫卵块用0.5%次氯酸钠消毒1min~2min，然后用灭菌水冲洗干净，转移到筛网上， 加入灭菌水，以水面刚好没过筛网而不淹没卵块为宜。在25℃～28℃下避光孵化2d～3d，然后收集2 龄幼虫，并用将2龄幼虫采用无菌水配制成悬浮液，通过显微镜检测线虫浓度，调整到1000条/mL用 于接种鉴定（参见A.3）。 3.2.3接种 在西瓜苗2片真叶期接种南方根结线虫 ，接种时 龄幼虫悬浮液均句地注人根际土壤中，每株接 种2000条2龄幼虫。每份西瓜材料 接种时 以高感根结线虫的西瓜 常管理。 0% 件下正 3.2.4病情调查 在接种后（42± 调查时检 西 发病情 况，根据根结占 情况。 根系区域的比例，确定根结线 害程度 手根据式 级别 病情指数（DI)。 病情级别的划分 S 病情级 症 0 没有根结 R 根结覆盖 域占整个限系白 01>>% 2 或占整个根系 内比例 为10%25% 限系的比例为 3 50%<P<75% 5 注：P表示百分 病情指数(D R X100 (1) 式中： 人 各病情级别数值与各病情义别植 内总和； 数 s 各病情级别数值 各病情级别病株数 n 服务平台 N 调查总株数，单位为株； S 最高病情级别数值。 3.2.5鉴定材料处理 鉴定完毕后将西瓜植株、残体及土壤基质集中进行无害化处理。 4抗性评价 4.1 鉴定有效性判别 当高感对照材料的病情指数大于或等于60（DI60）时，该批次抗性鉴定判定为有效。 4.2抗性评价标准 依据鉴定材料3次重复的病情指数平均值确定其抗、感水平，划分标准见表2。 2 NY/T3065—2016 表2西瓜对南方根结线虫病抗性的评价标准 病情指数(DI) 抗性评价 DI=0 免疫(IM) 0<D≤10 高抗（HR） 10<D≤25 抗(R) 25<DI≤40 中抗（MR） 40<D≤60 感病(S) DI>60 高感(HS) 4.3抗性评价报告 依据西瓜材料3次重复鉴定的病情指 均值确定西瓜材料的抗性水平，对鉴定材料进行抗 LD 病性评价，写出正式鉴定报告， 并 人 标 服务平台 3 NY/T3065—2016 附录A 资料性附录） 南方根结线虫 A.1学名和形态描述 A.1.1学名 南方根结线虫Meloidogyneincognita（KofoidandWhite)Chitwood]。 A.1.2形态描述 南方根结线虫幼虫呈细长蠕虫状，体长340μm~460μm，体宽13μm~15μm。雌雄异形，雌成虫 梨形，埋藏于寄主组织内，大小（440~1300）μm×（325～700）μm。食道垫刃型，中食道球发达。会阴 花纹背弓高，呈方形，侧线明显，平滑至波浪状，线纹细至粗状，有时呈锯齿状，尾端常具轮纹。雄成虫线 状，尾端稍圆，大小（700~1900）μm×（30~36）μm；卵长椭圆形，大小约83μm×38μm。 服务平台 40 μm 图A.1南方根结线虫（Meloidogyneincognita）雌虫会阴花纹形态（A~H）墨线图 NY/T3065—2016 A.2生理小种 A.2.1采用的鉴别寄主 通用的鉴别寄主为6种植物：烟草（Nicotianatabacumcv.NC95）、棉花（Gossypiumhirsutumcv. Deltapinel6）、辣椒（Capsicum frutescens cv.CaliforniaWonder）、西瓜（Citrullus lanatus cv.Charles tonGray）、花生（Arachishypogaea cv.Florunner)番茄（Solanumlycopersicum cv.Rutgers)。 A.2.2生理小种鉴定 南方根结线虫分离后，根据在鉴别寄主形成的根结数目确定是否为亲和反应，以特定的亲和反应组 合划分生理小种（表A.1)。 表A.1南方根结线虫生理小种的鉴定 鉴别寄主 生理小种 烟草 棉花 辣椒 西瓜 花生 番茄 1 + + + 2 + + + X 3 + + + + 4 + + + + 十 注1：接种后40d~60d调查，每株根系的根结数目0个～2个为不亲和，用* "表示：根结数目3个或3个以上为亲 和，用“十”表示 注2：生理小种按《植物病原线虫学》第14章"线虫接种和抗性鉴定技术”（刘维志主编，2000年，中国农业出版社）的分 类法划分。 A.3南方根结线虫的分离及保存 A.3.1分离 采集感染南方根结线虫的病株，直接挑取根结上的卵块。单卵块直接接种在感病寄主根部进行培 养，在25℃~28℃、土壤相对湿度70%~80%条件下培养40d~60d，收集扩繁的卵块，采用0.5%次氯 酸钠溶液对卵块进行浸泡消毒，轻轻震荡1min，弃液体，用灭菌水冲洗卵块3次去掉次氯酸钠残留。将 干净的卵块转移到100目细筛网上，置于培养血，以水面没过筛网而不淹没卵块为宜。在25℃～28℃ 下避光孵化2d～3d，然后收集筛网2龄幼虫，经形态学或生物学鉴定为南方根结线虫[Meloidogyne incognita（KofoidandWhite)Chitwood]，确定分离成功，可用于接种鉴定。 A.3.2繁殖 将经过鉴定的南方根结线虫接种在高感寄主植物的根部，在25℃～28℃、土壤相对湿度70%～ 80%条件下培养40d～60d。接种前从寄主植物根系上挑取卵块孵化2龄幼虫制备接种体，方法同 3.2.2步骤。 A.3.3保存 采用活体保存方法，将南方根结线虫接种在高感寄主植物的根部，在25℃～28℃、土壤相对湿度 70%～80%条件下培养，并且每60d重新进行一次线虫分离、收集及接种，保障南方根结线虫的活性和 数量。