ICS65.020.99 CCSB90T/ZNZ 浙江省农产品质量安全学会团体标准 T/ZNZ162—2023 葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determinationofstreptomycinanddihydrostreptomycinresiduesingrape -methodofliquidchromatography-tandemmassspectrometry 2023-01-18发布 2023-02-18实施 浙江省农产品质量安全学会发布 全国团体标准信息平台 T/ZNZ162—2023 I前  言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。 本文件起草单位：浙江省农业科学院农产品质量安全与营养研究所。 本文件主要起草人：刘真真、王新全、王强、齐沛沛、王娇、狄珊珊、赵慧宇、汪志威、徐浩。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ162—2023 1葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量检测的液相色谱-串联质谱方法。 本文件适用于葡萄中链霉素和双氢链霉素残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 葡萄试样匀浆后采用磷酸水溶液提取，经高速离心，固相萃取柱净化后，采用液相色谱-串联质谱 仪检测，外标法定量。 4试剂和材料 除特别注明外，分析时使用试剂均为色谱纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）。 4.2甲酸（HCOOH，CAS号：64-18-6）。 4.3磷酸（H3PO4，CAS号：7664-38-2）。 4.41-己烷磺酸钠（C6H13NaO3S，CAS号：2832-45-3）：分析纯。 4.5标准品硫酸链霉素（C42H84N14O36S3，CAS号：3810-74-0）和硫酸双氢链霉素（C42H88N14O36S3，CAS号： 5490-27-7）：纯度≥98.0%。 4.6甲醇-水溶液（40+60，V/V）：准确量取40.0mL甲醇（4.1），用水定容至100mL。 4.7硫酸链霉素和硫酸双氢链霉素标准储备液（1000mg/L，分别以链霉素和双氢链霉素）：准确称取 硫酸链霉素和硫酸双氢链霉素标准品均约12.5mg，精确到0.0001g，置于10mL容量瓶中，用甲 醇-水溶液（4.6）溶解并定容至刻度，配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备溶液。在-18℃避 光保存，有效期为6个月。 4.8硫酸链霉素和硫酸双氢链霉素标准工作溶液（100mg/L和10mg/L）：分别移取1.0mL和0.1mL 的链霉素和双氢链霉素标准储备溶液于10mL容量瓶中，用甲醇-水溶液（4.6）分别定容，配制成 浓度为100mg/L和10mg/L的标准工作溶液，0℃～4℃下避光保存，有效期为1个月。 4.9磷酸水溶液（pH=2.0）：量取适量水，用磷酸（4.3）调节至pH=2.0。 4.101-己烷磺酸钠溶液（0.5mol/L）：称取9.41g1-己烷磺酸钠（4.4），用水溶解，转移至100mL 容量瓶后，加水定容，摇匀。 4.11甲酸-甲醇溶液（10+90，V/V）：准确量取100.0mL甲酸（4.2），用甲醇（4.1）定容至1000mL。 4.12甲酸-水溶液（1+999，V/V）：准确量取1.00mL甲酸（4.2），用水定容至1000mL。 4.13甲酸水-甲醇溶液（60+40，V/V）：准确量取60.0mL甲酸-水溶液（4.12），用甲醇（4.1）定容 至100mL。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ162—2023 24.14固相萃取柱：苯乙烯二乙烯苯-N-乙烯基吡咯烷酮聚合物柱（6mL，500mg）或相当者。 4.15微孔滤膜：0.22μm，有机相，或相当者。 5仪器设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。 5.3离心机：转速不低于8000r/min。 5.4涡旋混合仪。 5.5固相萃取装置。 5.6氮吹仪。 5.7组织捣碎机。 5.8超声波清洗仪（频率：≥40KHz）。 6试验步骤 6.1试样制备和保存 葡萄样品全果（去柄），用组织捣碎机匀浆后，装入洁净容器，密封，置于-18℃冷冻保存。 6.2提取 称取试样约5g（精确到0.01g），置于50mL离心管中，准确加入10mL磷酸水溶液（4.9）， 置于超声清洗仪中超声萃取15min，涡旋混合1min，在8000r/min下离心3min，取全部上清液； 随后向上清液中加入2mL1-己烷磺酸钠（4.10），涡旋混匀，静置10min，待净化。 6.3净化 固相萃取柱（5.5）固定在固相萃取装置上，依次用5mL甲醇（4.1）、5mL水对固相萃取柱进行 预活化，然后将上述待净化液（6.2）以小于1.5mL/min流速通过固相萃取柱，待样液全部通过，固相 萃取柱近干后，依次用5mL磷酸水溶液（4.9）、10mL水淋洗固相萃取柱，弃去全部流出液。负压抽 干固相萃取柱，用6mL甲酸-甲醇溶液（4.11）进行洗脱，收集全部洗脱液。将洗脱液置于氮吹仪上， 35℃下氮气吹干后，残留物用1mL甲酸水-甲醇溶液（4.13）溶解，涡旋混匀后，经0.22μm滤膜过 滤后，供液相色谱-串联质谱仪分析。 7测定 7.1液相色谱-串联质谱测定 7.1.1液相色谱参考条件 液相色谱条件如下： a）色谱柱：T3色谱柱，100mm×2.1mm（内径）,1.8μm粒径，或相当者。 b）柱温：35℃。 c）进样量：2μL。 d）流动相及洗脱条件：流动相A为0.1%甲酸水（4.12），流动相B为甲醇（4.1），A:B（V/V）=60:40 （V/V）等度洗脱。 e）流速：0.3mL/min。 7.1.2质谱参考条件 质谱条件如下： 全国团体标准信息平台 T/ZNZ162—2023 3a）离子源：电喷雾离子源（ESI）。 b）扫描方式：正离子扫描。 c）检测方式：多反应监测（MRM）。 d）电喷雾电压：3500V。 e）离子源温度：400℃。 f）接口温度：300℃。 g）雾化气流量：3.0L/min。 h）干燥气流量：10.0L/min。 i）加热气流量：10.0L/min。 j）质谱参数见表1。 表1链霉素和双氢链霉素质谱参数条件 化合物名称保留时间 （min）定量离子对 （m/z）定性离子对 （m/z）碰撞能量 （eV） 链霉素 （Streptomycin）0.68 582.3/263.1582.3/263.1; 582.3/246.031; 39 双氢链霉素 （Dihydrostreptomycin）0.68 584.2/263.1584.2/263.1; 584.2/246.133; 41 注：7.1.2的质谱条件仅供参考，当采用不同质谱仪器时，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳 7.2基质匹配标准工作溶液配制 称取空白葡萄样品，按照6.2和6.3部分进行前处理，获得空白基质提取液。精准吸取一定体积的 链霉素和双氢链霉素标准溶液分别加到空白基质提取液中，配制质量浓度为0.002mg/L、0.005mg/L、 0.010mg/L、0.025mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.25mg/L和0.40mg/L的系列标准工作溶液，或 根据仪器响应与实际情况配制适当浓度范围的标准曲线。经液相色谱-串联质谱仪分析后，以链霉素和 双氢链霉素的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准溶液曲线。基质标准工作液应现用现配。 7.3定性测定 依据上述条件进行样品测定分析，样品中检出的色谱峰保留时间与基质标准溶液中目标物的保留时 间相一致（±2.5%）；所选择的两对离子对均出现，且定性离子对的离子丰度比偏差不超过表2规定的 范围，可判定样品中存在对应的待测物残留。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 离子丰度比（%） >50 20～50 10～20 ≤10 允许最大偏差（%） ±20 ±25 ±30 ±50 7.4定量测定 外标法定量：链霉素和双氢链霉素的多反应监测（MRM）色谱图见附录A。 7.5平行试验 按照上述6.2、6.3和7.1的步骤，对同一试样进行平行试验测定。 7.6空白试验 除不称取试样外，均按上述6.2、6.3和7.1的步骤进行。 8试验数据处理 试样中链霉素或双氢链霉素残留量以质量分数ω计，单位为毫克每千克（mg/kg），按公式（1）或 （2）计算： 全国团体标准信息平台 T/ZNZ162—2023 4 式中： ω——试样中链霉素和双氢链霉素含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； ρ1基质匹配标准工作溶液中被测物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）; ρ2从基质匹配标准工作曲线中获得的试样溶液中被测物的浓度，单位为毫克每升（mg/L）； A试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积； As基质匹配标准工作溶液中被测物的质量色谱图峰面积； V试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； m试样溶液的质量，单位为克（g）； 1000换算系数； 计算结果应扣除空白