ICS 65. 020. 01 CCS B16 DB53 云南省地 國方 電标准 DB53/T 1145—2023 切花百合病毒种类高通量鉴定和检测技术 规程 地方标准信息服务平台 2023-02-23 发布 2023-05-23 实施 云南省市场监督管理局 发布 地方标准信息服务平台 DB53/T 1145—2023 前創言 本文件按照GB/T 1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南大学提出。 本文件由云南省花卉标准化技术委员会(YNTC 08)归口。 本文件起草单位：云南大学、宁波大学。 本文件主要起草人：王建光、彭杰军、陈剑平、燕飞、鲁宇文、郑红英、吴官维、饶绍飞。 地方标准信息服务平台 I 地方标准信息服务平台 DB53/T 1145—2023 切花百合病毒种类高通量鉴定和检测技术规程 1范围 本文件规定了切花百合病毒种类高通量鉴定和检测的术语和定义、样品采集与处理、切花百合病毒 种类高通量鉴定和检测方法以及结果判定的技术要求。 本文件适用于已报道的切花百合病毒种类的鉴定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 28071黄 黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫鉴定方法 GB/T 30989 高通量基因测序技术规程 GB/T 35537 高通量基因测序结果评价要求 GB/T 35890 高通量测序数据序列格式规范 GB/T 40664 用于高通量测序的核酸类样本质量控制通用要求 NY/T 402脱毒甘薯种薯(苗)病毒检测技术规程 NY/T 1744切花百合脱毒种球 3术语和定义 GB/T 30989—2014、GB/T 35890—2018、GB/T 40664—2021及NY/T 1744—2009界定的以及下列术 语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了GB/T 30989—2014、GB/T 35890—2018、GB/T 40664—2021及NY/T 1744—2009中的某些术语和定义。 3. 1 切花百合病毒病 cut lily virus diseases 指由单一或复合病毒侵染百合植株造成植株矮化、花朵变小；叶片花叶、褪绿、斑驳、规则或不规 息服务平 则坏死斑、畸形等疑似病毒为害症状的病害。 [来源：NY/T 1744—2009,4.23，有修改] 3. 2 高通量测序 high-throughput sequencing 又称“下一代测序技术”（Next-generation sequencing technology），区别于传统双脱氧测序， 是指一种能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术，通常一次测序反应能产生不低于100 Mb的测序数据。 [来源：GB/T 30989—2014,7.24，有修改] 3. 3 测序片段 reads DB53/T 1145—2023 高通量测序平台产生的含有碱基序列和质量值的序列片段。 [来源：GB/T 35890—2018,2.6] 3.4 转录组高通量测序 transcriptome high-throughput sequencing 基于高通量平台,针对细胞内某一功能状态下所能转录出来的所有RNA(主要包括mRNA和非编码RNA), 进行平行序列测定的技术，通常一次测序反应能产生不低于100 Mb的测序数据。 3.5 过滤片段 clean reads 指高通量测序reads序列过滤后的测序片段。 部 3.6 测序通量 throughput of gene sequenc ing 单次测序可获得序列信息的基 因片段数量或可测定的脱氧核糖核酸（以碱基表示）数量。 [来源：GB/T 30989—2014, 241 3.7 核苷酸 nucleotide 构成核酸的基本单位，由五碳糖 磷酸和环状的含氮碱基 ［来源：GB/T 30989—2014, 7. 24] 3.8 测序读长 : read length gene sequencing 测序能测的最长基因片段， 通常以碱基数表示。 24] [来源：GB/T 30989—2014, 3.9 碱基识别质量 quality of bas6 calling 的碱基占总碱基的百分比，Q30表示测序质量值大于 F30的碱基占总碱基的百分比。 [来源：GB/T 30989—2014,7.24] 息服务平台 3.10 RNA完整值(RIN） RNA integrity number(RIN) 反映RNA完整性的数值。 [来源：GB/T 40664—2021,10.11] 3.11 接头 adapter 为一段已知的短核苷酸序列，用于链接未知的目标测序片段。 2 DB53/T 1145—2023 3.12 FASTQ 格式 FASTQ format FASTQ是基于文本的、保存生物序列（通常是核酸序列）和其测序质量信息的、每四行表示一条序 列的标准格式。 [来源：GB/T 35890—2018,2.6，有修改] 3.13 核酸序列对蛋白质序列库比对 BLAST X 自动将输入的核苷酸序列翻译为氨基酸序列后（根据可能的读码框和编码链的差别，一段核苷酸序 列可能翻译为六种氨基酸序列），比对数据库中的蛋白质序列。 3.14 植物病毒分离物数据库 database solates 已公布的所有植物病毒分离物序列合集 4样品采集与处理 地方标 4.1仪器与试剂耗材 行 4.1.1 设备 -20℃冰箱，高压灭菌锅，感量为0 g的电子天平 4. 1. 2 器具 次性手套，一次性采样 管 高压灭菌的打孔器（直径1cm）。 4.1.3 试剂 75%乙醇，液氮，三氯甲烷， 异丙醇 y 4.2取品采集 南 4.2.1采样要求 将采集的百合种球或疑似病毒病的百 合叶片放入有编号的自封袋中，宜4℃条件下运输到实验室。 采样过程中，应佩戴一次性手套，每采一个样品更换 次手套，并用75%乙醇消毒采样工具。 4. 2. 2 百合脱毒种球取样 百合脱毒种球抽样方法执行NY/T1744中5.3.1的规定，抽样数量执行NY/T 402中4.2.1的规定。 4.2.3切花生产用脱毒种球的取样 切花生产用脱毒种球抽样方法执行NY/T1744中5.3.1的规定，抽样数量执行NY/T402中4.2.1的规 定。 4.2.4百合叶片的取样