65.020.01 ICS B 16 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1920—2020 马铃薯黄萎病室内抗性鉴定技术规程 Technical Regulation for Resistant Identification to Potato Verticillium Wilt Indoor 2020-06-28 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 2020-07-28 实施 发 布 DB15/T 1920—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古农业大学提出。 本标准由内蒙古自治区马铃薯生产与种植标准化技术委员会（SM/TC42）归口。 本标准起草单位：内蒙古农业大学、河北省农林科学院植物保护研究所、中国农业大学。 本标准主要起草人：王东、周洪友、孟焕文、赵君、张键、马平、张力群、李社增。 I DB15/T 1920—2020 马铃薯黄萎病室内抗性鉴定技术规程 1 范围 本标准规定了马铃薯黄萎病室内抗性鉴定的材料准备、鉴定方法及品种抗性水平划分等技术内容。 本标准适用于马铃薯品种（系）在室内条件下对黄萎病抗性水平的鉴定。 2 材料准备 2.1 培养基制备 PDA 培养基：马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、琼脂粉 18 g，加水定容至 1000 mL；121 ℃高压湿热灭 菌 25 min，冷却至室温备用。 麦麸培养基：将麦麸与水按质量比 1:1 搅拌均匀后，装入 1000 mL 三角瓶中，每瓶 100 g；121 ℃ 高压湿热灭菌 30 min，冷却至室温备用。 2.2 菌种制备 供试黄萎病菌：选用马铃薯黄萎病菌标准菌株。 菌株活化及培养：将保存的黄萎病菌菌株置于 PDA 平板进行活化。25 ℃下，培养 5 d～7 d 后，用 打孔器在菌落边缘打取直径 5 mm 的菌饼，取 2～3 块菌饼接入灭菌的麦麸培养基中，黑暗条件下培养 15 d。 2.3 对照品种选择 抗病对照品种克新1号，感病对照品种费乌瑞它。 3 鉴定方法 3.1 接种液制备 布满黄萎病菌的麦麸培养物中加入无菌水 500 mL 搅拌均匀，经 4 层纱布过滤获得孢子悬浮液。在 显微镜下通过血球计数板计数，将孢子悬浮液的浓度调至 107 个孢子/mL。 3.2 接种方法 选用鉴定品种的原原种进行育苗，当幼苗长到 2～4 片叶时，将幼苗取出从根尖减掉 0.5 cm，将根 系浸入接种液 15 min；然后移栽至装有灭菌土的花盆，放置于 25 ℃、光照强度 4000 lx、光暗交替条 件下进行培养 30 d。 1 DB15/T 1920—2020 3.3 病情调查 根据马铃薯黄萎病发病程度分级标准（表 1），记录室内马铃薯植株的地上部黄萎病发病情况，计 算发病率和病情指数。调查表见附录 A。 发病率=（发病总株数/调查总株数）×100 %…………（1） 病情指数 DI=［Σ（各级病株数×该病级代表数值）/（调查总株数×发病最高级的代表数值）］ ×100…………（2） 表1 马铃薯黄萎病发病程度分级标准 级别 发病程度 代表数值 1 健株，叶片无症状； 0 2 病株叶片 25%以下出现症状，叶肉变为淡黄色或呈不规则形的黄色病斑； 1 3 病株叶片 25%～50%表现症状，病斑颜色大部分变成黄色或黄褐色，叶片边缘略有卷枯； 2 4 病株叶片 50%以上表现症状，有少数叶片凋落； 3 5 全株叶片发病，多为褐色掌状枯斑，叶片有的脱落成光杆，以致整株枯死。 4 4 品种抗性水平划分 依据各品种的病情指数对不同来源品种抗性级别进行划分，划分标准见表2。 表2 马铃薯对黄萎病抗性分级标准 抗病型 免疫 Immune 高抗 High Resistant 病情指数 DI 0 0＜DI＜10.0 抗病 Resistant 10.0≤DI＜20.0 耐病 Tolerant 20.0≤DI＜35.0 感病 Sensitive DI≥35.0 2 DB15/T 1920—2020 AA 附录 A （规范性附录） 马铃薯黄萎病调查表 表 A.1 马铃薯黄萎病调查表 马铃薯品种 0级 1级 2级 3级 4级 5级 病情指数 _________________________________ 3