ICS 65.120 B 46 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 1360—2019 代替 DB34/T 1360-2011 饲料中地克珠利的测定 高效液相色谱法 Determination of diclazuril in feeds—High performance liquid chromatography method 文稿版次选择 2019 - 12 - 25 发布 安徽省市场监督管理局 2020 - 01 - 25 实施 发 布 DB34/T 1360—2019 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准代替 DB34/T 1360-2011《饲料中地克珠利的测定 高效液相色谱法》，与 DB34/T 1360-2011 相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： ——修改了范围（见第 1 章）； ——修改了原理（见第 3 章）； ——修改了试剂材料（见第 4 章）； ——修改了提取方法（见 7.1）； ——修改了高效液相色谱条件（见 7.2.1）； ——修改了精密度（见第 8 章）； 本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省动物疫病预防与控制中心、肥西县动物疫病预防 控制中心、宿州市动物卫生监督所、合肥市动物疫病预防与控制中心。 本标准起草人：吴蕾、陈静、董先敏、刘红云、汤春莲、杨清、蔡一杰、王群、周磊。 本标准第一次修订。 I DB34/T 1360—2019 饲料中地克珠利的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中地克珠利含量测定的高效液相色谱法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和预混合饲料中地克珠利含量测定。 本标准定量限为 0.5 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样 3 原理 试样加入乙腈提取，正己烷除脂净化，以甲醇-0.3％醋酸水溶液为流动相，梯度洗脱，高效液相色 谱仪(二极管阵列检测器)测定，外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 除特殊说明外，本方法所用试剂均为分析纯，用水符合 GB/T 6682 中一级用水的规定。 4.2 乙腈。 4.3 醋酸。 4.4 正己烷。 4.5 甲醇：色谱纯。 4.6 N，N-二甲基甲酰胺：色谱纯。 4.7 流动相：甲醇-0.3％醋酸水溶液（3 mL 醋酸+997 mL 水）。 4.8 地克珠利标准品：纯度≥99.0％，CAS 号：101831-37-2。 4.9 地克珠利标准溶液的制备 4.9.1 地克珠利标准溶液贮备液：精确称取 20 mg 地克珠利标准品(精确至 0.01 mg)于 50 mL 容量瓶 中，用 N，N-二甲基甲酰胺溶解，此溶液浓度为 400 μg/mL，4℃保存，有效期 3 个月。 4.9.2 地克珠利标准工作溶液：分别吸取贮备液（4.9.1）0.2 mL、1 mL、2 mL、5 mL、10 mL、20 mL 于 200 mL 容量瓶中，用乙腈定容，标准工作溶液系列浓度分别为 0.4 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL、10 μg/mL、 20 μg/mL、40 μg/mL。 5 仪器和设备 1 DB34/T 1360—2019 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9 5.10 5.11 5.12 6 高效液相色谱仪(配二极管阵列检测器)。 分析天平：感量 0.01 g、0.01 mg。 离心机：≥10000 r/min。 超纯水仪。 分析筛：孔径 0.42 mm。 粉碎机。 微孔滤膜：孔径 0.45 μm 尼龙滤膜。 涡旋混合仪。 水平摇床。 旋转蒸发仪。 鸡心瓶。 移液器：200 μl、1000 μl。 试样的制备 按 GB/T 14699.1 的规定采样，选取饲料样品 500 g 以上，四分法缩减至 100 g，磨碎，全部通 过分析筛(5.5)，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 7 分析步骤 7.1 提取 7.1.1 称取试样 2.0 g，精确至 0.01 g，置于 50 mL 离心管中，加入 15 mL 乙腈，涡旋混合 1 min， 300 r/min 振荡提取 10 min，10000 r/min 离心 10 min，转移上清液至另一离心管中，残渣用 15 mL 乙腈重复提取一次，合并两次上清液至鸡心瓶中，50℃减压蒸发至干，加入 2 mL 乙腈、2 mL 正己烷至 鸡心瓶中，涡旋混合 1 min。 7.1.2 将试样提取液（7.1.1）4 mL 转移至离心管，10000 r/min，离心 5 min，取下层液 1 mL 用 0.45 μm 尼龙滤膜过滤，滤液作为试样溶液上机测定。 7.2 测定 7.2.1 高效液相色谱条件 色谱柱：C18 型柱，长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 μm，或相当性能C18 柱。 检测波长：280 nm。 流动相：甲醇-0.3％醋酸水溶液，梯度洗脱条件见表1。 流速：1.0 mL/min。 进样体积：10 μL。 表1 2 流动相梯度洗脱条件 时间 min 0.3％醋酸溶液 ％ 甲醇 ％ 0 30 70 22～22.1 30～0 70～100 DB34/T 1360—2019 表 1（续） 7.3 时间 min 0.3％醋酸溶液 ％ 甲醇 ％ 28.1 30 70 35 30 70 上机测定 按上述色谱条件，分别将地克珠利标准工作溶液（4.9.2））和试液（7.1.2）上机测定，以单点或 多点校准，以色谱峰面积积分值定量。参见附录色谱图A.1。 7.4 结果的计算与表述 7.4.1 计算公式 结果按式(1)计算： ................................. (1) 式中： X ——试样中地克珠利含量，单位为毫克/每千克（mg/kg）； C ——试液色谱峰对应的地克珠利浓度，单位为微克/每毫升（μg/mL）； m ——试样质量，单位为克（g）； V ——定容体积，单位为毫升（mL） f ——稀释倍数。 7.4.2 结果表示 平行测定结果用算术平均值表示，计算结果保留 3 位有效数字。 8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的 10％。 3 DB34/T 1360—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 地克珠利标准溶液的液相色谱图 图A.1 地克珠利标准溶液的液相色谱图 _________________________________ 4